求助，hiPS诱导EB逐渐消散!

ligangtiancai

如题，我的hiPS在悬浮诱导EB后开始逐渐从边缘脱落，3天后基本上就全散开了，很是郁闷。。
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6 J9 N# p7 ]1 t) _; W3 e2 m* C问题如下：
# a& a8 Y9 e& m$ e" j; E9 G+ V     1 EB逐渐脱落散开的原因？
& q3 T( l  J  D+ G# d; V/ M2 O     2 如果是支原体污染，如何检测和去除？
  w+ Q1 o8 C! U0 Y/ k   1 J8 ]$ d3 g7 w  y( l! ?0 i% P/ X
                   谢谢！

bio-bin

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" T0 E+ l# O' H* _; u
2 p: a( Z4 ^& ~我也遇到同样的问题。我想请教一下，你用的EB培养液是什么?（DMEM/F12+20%K-SR+1%NEAA+1%Glu+2mM βME? 还是不用k-SR，加血清？)，另外你的hIPS形成EB前是维持在有饲养层上，还是在matrigel上？

ligangtiancai

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5 w# B; }, y- b4 z
/ p: m! i3 j8 m2 C0 _. U9 {做EB时用的是MEF的培养基， 高糖DMEM80%（PAA）+FBS（PAA）+1%NEAA+1%L-Glu。EB是悬浮培养的，接种前去除MEF

jefferson

建议换二楼说的培养基试下，不过用FBS替换KSR，即DMEM/F12+20%FBS+1%NEAA+1%Glu+2mM βME，也就是EB20培基。
4 l7 y5 @: B, C+ I( W+ E" ~! m3 P7 A! u
另外，如果有支原体污染，直接丢吧，基本没办法去除的。即便加药，效果也不好。

ligangtiancai

回复 jefferson 的帖子8 y$ {& c# n) R4 S( v4 F

0 q5 [0 G1 T% w6 d7 g( Q: K恩，我试下，请问你用的FBS是什么牌子的，是否是ES-qualified的？谢谢

jefferson

回复 ligangtiancai 的帖子( x7 F) F* @" W# A- F6 p( i
& ]- Z# o( W9 T  K
GIBCO

echoxy1020

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" z' F/ I* N- Q
# n6 e' E! k' C/ j请问一下为什么建议用FBS替换KSR？有什么区别吗？

wangxiang

支原体检测可以用PCR的方法，清楚推荐sigma的BM-CYCLIN。如果不是重要细胞，建议就直接扔掉吧，杀的周期较长。