求助啊！慢病毒感染问题！ - 病毒转染干细胞专区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 69422\|回复: 6	go 求助啊！慢病毒感染问题！ [复制链接]

YLL824WAN

新手上路

Rank: 1

积分: 37
威望: 37
包包: 259

楼主

发表于 2012-4-5 17:11 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本人在做慢病毒感染目的细胞HUVECs，实验组慢病毒包装有两个转录因子，对照组是慢病毒包装的空质粒，其余条件都相同。之前预实验已摸出MOI值，且当时96小时时观察到了荧光。今天又去看荧光，结果对照组荧光特别漂亮，转染率几乎100%，而实验组却基本看不见荧光，仅有少量零星的亮点，完全不见细胞轮廓。本人真的很困惑，操作及试剂都是一样的，望高人指点迷津啊！不甚感激！

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

收藏0 分享0 顶0 踩0

回复引用

举报返回顶部

lxm5668

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 428
威望: 428
包包: 1173

金话筒优秀会员

沙发

发表于 2012-4-6 08:23 |只看该作者

根据我的教训，分析可能两种情况，仅供参考：
1.被包装的质粒出现了问题，之前测过序或在细胞中检测过表达情况吗，即使在这些都做过的情况下，提取质粒也能出现问题，将待包装的质粒重新检测其表达情况；
2.做病毒包装时，实验组出现了问题，或许哪个组分忘了加进去。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 10	+ 20	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10 包包 + 20 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

linzi214

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 506
威望: 506
包包: 699

金话筒优秀会员

藤椅

发表于 2012-4-6 11:38 |只看该作者

会不会是装载两个转录因子导致质粒比较大，增加了转染难度。或者如楼上所说，插入的片段序列是否正确，能否正确转录翻译。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 5	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 5 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

YLL824WAN

新手上路

Rank: 1

积分: 37
威望: 37
包包: 259

板凳

发表于 2012-4-6 16:44 |只看该作者

回复 linzi214 的帖子

应该不会啊！我之前两次预实验都有荧光表达的，这次操作什么的都是一样的，不知道为啥就没有……

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

YLL824WAN

新手上路

Rank: 1

积分: 37
威望: 37
包包: 259

报纸

发表于 2012-4-6 16:45 |只看该作者

回复 lxm5668 的帖子

我之前两次预实验都做出来荧光的，应该没问题的。这次我都做得很小心，没有漏加什么啊！5555

回复引用

举报返回顶部

wangsandan0503

注册会员

Rank: 2

积分: 69
威望: 69
包包: 820

地板

发表于 2012-4-6 17:07 |只看该作者

回复 YLL824WAN 的帖子

没有说清楚，是转染，还是感染？据你描述应该是包装好的慢病毒，然后感染目的细胞，出现这样的问题，原因：9 b2 w1 R- ^# B4 v; _) j- a/ @
1细胞密度太大，细胞状态不佳。 \" Q' _! q2 w
2慢病毒表达载体加的两个因子片段如果太大，会影响感染效率。