慢病毒感染细胞

rexhz

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我用的是第二代系统，现在都出到第三代了。可以从addgene上面买，不过做IPS的现在国内人很多，可以找人要

huangcong1988

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9 X6 ~- v( L. T, T9 ]  O哎，现在感觉国内做实验很少有无私的，很少能有把资源贡献出来的，想想真的还是比较钦佩国外的实验室，我现在用的这个质粒是师兄之前从国外写信索要的，人家连邮费都没有要，虽然这个系统很落后。心里不知道什么滋味，你是买的么？

rexhz

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7 V  }4 `  f1 D  D/ `: S我的也是老板以前从国外带回来的，国内能不能要到看老板人脉了

dengyanfei

最好先构建个带绿色荧光的病毒载体，这样就省事多了！

ouyi2738

回复 huangcong1988 的帖子; z0 I4 Z5 h5 M' {0 a- [
+ {+ }. y- v6 N. E) B: j. z# F
MOI不是测出来的。MOI1=1细胞：1病毒颗粒，MOI2=1细胞：2病毒。既然没荧光为甚非要测滴度呢，我曾经用的第一批质粒也没任何报告基因，四个因子还分成4个质粒，直接包装完用上清感染就是了，只是为得到ips的话没有问题。非要定量就试个MOI1，2，5，10，15，看看哪个死亡情况可以接受，理论上MOI10就可以100%了（仅仅是理论上的，一般达不到，但足够用了）。试几次自己把握就行了。还是赶紧叫老板给你要个新载体把，addgene挺麻烦，老外也没那么多无私的。建议你如果质粒是要的，回来先测序，以免白玩半天不知道问题出在哪。我认识个postdoc.向一个发了nature的作者要一个质粒要了四，五遍，寄过来都是错的，最后自己构了。我当年要个质粒也是拖了多半年，整得我都不好意思再0问了，一开始答应的特痛快，然后是漫长的等待拖拉，先是要转移协议，然后说质粒保存在公司不再实验室，又是只有冻存的菌种要先养起来，后来又是秘书休假，balabala最后不了了之，早说不给自己都构完了。。。。。。

huangcong1988

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4 t; N, i' W9 W9 ^( t8 Q6 n1 o谢谢，那我还是直接感染算了，但是直接上清感染，能得到iPS么？不用摸条件吗？而且这个很不准确吧？完了得到的iPS质量如何也不确定啊

ouyi2738

回复 huangcong1988 的帖子3 f- j3 b5 w, Q& g: W

$ e) R0 q$ Q6 s9 Q# W4 U; {最早的几篇文章不都是这么做的么，以我的经验用这种方法小鼠的很容易得到ips。至于质量就看你经验和运气了，成千上万个克隆，只要你各因子的量差别不是特别大，肯定会有好克隆的。没有OG或OR的细胞系，挑克隆和鉴定确是很麻烦。

遗云射月

定量测病毒滴度怎么测？我用的载体也不带荧光，是用带荧光的空载体估算的

cochongg

1:1一个细胞一个病毒

不倒翁

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; I0 i3 l1 F8 k" ~6 Z: U! d, M5 J6 T% H
空载体也不带GFP么 我们一般是转一个空载体比如pMX-GFP做对照来估计转染效率的