求助为什么我养出来的CIK细胞集落大部分贴在壁上啊，急！

花饶然

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有没有哪位大侠做脐血诱导CIK的？为什么我养出来的CIK细胞集落大部分贴在壁上啊，急！

xuchao717

我现在在做脐血的CIK 结果还不错，你说的CIK细胞集落大部分贴在壁上是多少天的时候的？8 r; B( b# {) Z& l) {% I' M5 W
你做脐血来源的CIK目的是什么呢？

jack063@163.com

集落生长到一定天数都会有这样的 一种情况吧，博士说他们相互依存的生长的才好，长成熟了就会散开一些。我们目前做法有2种一种是： 　抽取外周血20ml,利用密度梯度离心法分离并收集单个核细胞,用RPM I - 1640完全培养基洗涤3次,调整细胞到1 ×106 /ml,加入IFN - γ1000u /ml, 24h后加入rh IL - 2 1000u /ml, anti - D3McAb50ng/ml,孵箱中常规条件培养,以后隔天换液同时补加rh IL - 2 1000u /ml。培养21d收集细胞,经毒理、热原试验和细菌培养、真菌培养阴性合格后,回输细胞总数为116 ×101 0,悬浮于含500g/L 人血白蛋白生理盐水250ml内,分别于术前、术后分4次回输给患者。另一种略。不知道对你有没有帮助！

meixue1130

我前段时间也做了脐血诱导CIK的，培养的前三四天现象和你的差不多哈，也是细胞集落大部分贴在壁上，后来开始增值后，悬浮的集落就多起来了，再后来大约培养1个星期后，集落基本就消失了哈。

花饶然

回复 meixue1130 的帖子% L/ ~7 t( K8 O$ U5 X; T
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我当时扩瓶的时候用刮刀才挂下来的，根本吹打不下来。不知道这样会否有影响

花饶然

回复 xuchao717 的帖子3 @& F$ Z8 w9 {2 ~) e. d2 D1 D! A

- g9 N9 I/ y5 F$ A我的是第五天打算扩瓶的时候发现贴在壁上的，之前养外周血没有出现这样的情况的。方法和传统养外周血CIK一样的现在。不知道高手有什么独到的经验，，介意分享不？

xuchao717

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" W( `2 M9 m: i% y) N我培养的情况和meixue1130的是一样的，贴在壁上的细胞集落会逐渐消失的。细胞因子的添加量和外周血也是一样的。你的培养基是什么？有没有加血清？细胞贴壁可能是你的细胞状态不够好。

xuchao717

建议你扩瓶的时候不用把贴壁的细胞特意刮下来，继续培养即可

花饶然

呵呵，我今天看了我扩增的细胞，的确回复正常了，增殖也还好，集落多是悬浮状了。血清是加足了的。这个对启动是挺重要的

花饶然

呵呵，我今天发现细胞正常了。不再贴壁了，增殖也还好，谢谢各位了