过表达一种基因，mRNA表达情况，蛋白表达情况。

wangsandan0503

过表达一种基因之后，mRNA的表达水平会高出多少倍？蛋白大概多少倍呢？ mRNA的水平和蛋白的水平高表达的倍数是否一致？

hndxws

这个很难说的，要看什么过表达方式，过表达用的启动子，如果是转染，还要看转染效率。我觉得区间大概在10倍到10000之间都有可能。过表达的mRNA水平不一定与蛋白水平一致

shiyi

你需要做阴性对照和阳性对照，有没有差异要用统计学方法来判定。mRNA的表达水平和蛋白表达水平可能不一致，细胞内有很多翻译后修饰导致蛋白表达水平与mRNA表达水平不一致

opopcoco

一般选择内参基因作为参考水平，然后做相对定量，看过表达基因的表达水平。

wangsandan0503

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您的解释很好，翻译后修饰导致蛋白水平下降吗？还是升高？ 如果做阴性对照怎么做？

wangsandan0503

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您的疑问很到位，一看就知道是高手，目的基因的启动子为cmv 应该是最强的启动子了   我用的是慢病毒感染 不是转染  还有如果一个启动子下面加上 4个目的基因 表达水平会下降吗   如果会 怎么可以提高表达水平？

hndxws

加4个基因我没做过，但是理论上是可以知道结果的。最前面的基因表达最多，越往后的基因表达量越低。想提高表达水平，我们一般在表达框后加一个WPRE原件，它可以增加外源基因的表达量。

wangsandan0503

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" S8 n) j3 O! ?! ^, P非常感谢