关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

scienese

你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用

YYQ6301

嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度1 q3 @" W! {4 U. D& Q

cochongg

有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。
3 e* D0 R9 l" m% f1 ~: N5 M具体还是要看整体细胞状态。7 a  V& P# M& `8 f. u
建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。
) Y( N+ H7 m6 T3 J: |% ~1 _6 ^% g! @2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧
$ r7 N5 w3 p  ?% ]1 L3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）0 B8 s/ ?! F5 ^5 w! i' }
9 n4 F( b( }. D
希望对你有帮助) A0 z- R3 x: B; b

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子
( {! t( Z  ?) D, n! G
. G5 p  z7 x! f. Q这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!

cochongg

回复 YYQ6301 的帖子8 [  G7 a- R) {( @! g
3 {3 F8 ~7 J% l0 k; e
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。
4 \! Q3 w+ T8 u4 |我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。% X5 m) B& }; ?% G
原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子4 i8 ^; X& z% J% u4 ]! h. \

% F- ~# b  b5 g9 w/ A3 S嗯  那就放心了  主要是boss总觉得我们细胞养不好  郁闷的

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....:

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定6 R1 ~' `6 n! J9 T/ E9 f, m' m
个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂0 G, k" P& R: z, U" M) o& v
可以尝试挑克隆，再扩起来看看) y: d$ P6 k# G

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵