关于mES细胞培养中发生分化的问题

YYQ6301

请问一下，大家在小鼠胚胎干细胞正常培养的过程中有没有出现分化的现象？如果有，大家又是怎么处理的？如果没有，是不是一直传下去都没有分化现象，是如何做到的呢？希望大家能够谈谈自己的经验，交流一下，谢谢

scienese

你的培养基是还血清的还是无血清的呀，血清会有影响啊！另外，添加2i会有抑制分化的作用

YYQ6301

嗯，我们用的是有血清有Feeder的，LIF的浓度用的也是标准浓度
9 Q  W, c, _# q/ R8 E  B) W

cochongg

有分化是正常的，不过是个别，不要太多分化。
( _6 Y* B: c" b$ {2 K具体还是要看整体细胞状态。
( W5 ^& P' ~" K0 L8 w2 Z$ `建议：1、细胞状态好代数低的时候就该冻存一批，以备后用，不要一直传。
+ a- p2 l  i) K- F; B1 u2、细胞状态不好，分化多的时候，就别指望起死回生，再传也不会太好。（个别牛人例外）赶紧复苏吧
) p) i) E! N1 t1 f; [1 ?8 Q3、传代要一传N，或者按几个细胞浓度传。（这样好处是：得到不同状态的细胞，供对比作出调整，同时差的扔了，好的实验用或者继续传）
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# o, a9 |: K/ f* b希望对你有帮助
2 L0 {% {# M* O1 U( b. K, [

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子7 [/ t% _8 N6 P1 X; j: o; I% d' z
4 S7 X- M5 H' ~% z( I
这个建议不错，只是这样比较浪费呵呵！问一下你们一般传几代出现这样的问题啊，我们一般穿到3到4代的时候就会看到分化的迹象，真的是有点困惑!!!

cochongg

回复 YYQ6301 的帖子
2 f7 j+ s  S/ J! H4 i2 B2 y) {8 [8 P0 d$ W! s7 I  G
不要将焦点集中在分化的个别克隆团上面，要整体状态好。+ r8 L. Q% j: E; x
我们实验室养的ES也有分化，每代都有，具体是镜检看到克隆团的边缘有分化。
" E, k! S/ Q# }0 H7 J原因是：个别细胞启动了分化程序，并且会通过细胞信号影响周围，且不可逆。

YYQ6301

回复 cochongg 的帖子
9 R' ]. r- k# ?' t. V+ ~( r" Z) }
3 f* ^& ?$ o) r3 c1 _* N8 `# |" l嗯  那就放心了  主要是boss总觉得我们细胞养不好  郁闷的

guoye0210

我们实验室也遇到同样的问题，总是传个3-4代就分化，很无奈。ICR饲养层，血清用的GIBCO，LIF用的invitrogen，反反复复的复苏中....:

kalaka

是啊 我们也是 我们养在明胶上，LIF是COS细胞自制的，很不稳定
2 l* J+ r5 g$ i& T个人觉得mES很念旧，喜欢熟悉的手艺和试剂6 t) J6 {3 l: d0 U
可以尝试挑克隆，再扩起来看看$ a* b( G+ U- D1 z3 v

YYQ6301

看来不少人遇到这样的问题，我们可以讨论讨论，交流经验，呵呵