关于脂肪来源干细胞的计数问题，请注意细节操作！

相宜

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最近在做有抽脂病人腹部提取出来的脂肪干细胞，关于干细胞的技术问题，我们实验室设备有限，就买了两块血细胞计数板，请教各位高手这种板子是否可行，具体操作步骤请各位大侠不吝赐教。

xiaf_0

很多实验室都用这个。具体方法如下：
7 O$ {# L5 G+ f9 ?1 d2 O6 F9 i4 D1.以40ml细胞溶液为例，先将细胞混匀成单个细胞悬液6 u" i9 m8 {* n; i1 o% |% V
2.准备细胞计数板，用75%酒精将计数板冲洗干净，然后用一干净的盖玻片盖在中间的计数区。
9 m: Q& B6 |! Z, f4 R3.取0.02ml细胞悬液和等体积胎盘蓝染液混匀，注意胎盘蓝要配成工作液，稀释倍数看说明书。' e' _  S7 y( ^# g$ L% g$ f
4.用10ul的移液器取混匀的细胞悬液(胎盘蓝和细胞溶液）从盖玻片边缘注入。每个技术区的体积就是10ul。
, U$ |$ L7 W+ C+ H$ k- R5.在显微镜下开始计数，数4个大方格的细胞个数。然后用下面的公式计算
/ V' w2 B8 e! q1 PX/4* 2*10000*40 ' O, e3 I" x* s4 s( _1 y
注：X是4个大格子总的细胞数，2是稀释倍数（和胎盘蓝等量混匀，等于稀释了一倍），10000是固定的，40是总的细胞悬液量40ml。

zz091115

这个东西计数要是数的好比机器技术准

haibara007007

用板子自己计数要比仪器准的多，只要注意细胞浓度就没问题

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回复 xiaf_0 的帖子
" {. z$ @4 p/ W2 k5 Y
6 b1 G! l7 g; I; t非常感谢大侠的详细解答！

tinatina

另外强调一点，计数时应做至少两个重复计数，取其平均值。台酚蓝我们买的是已经配好的工作液，直接1：1就可以，不用再稀释。自己的细胞样本稀释浓度关系很大，两个浓度计数可以相差很远。

相宜

5.在显微镜下开始计数，数4个大方格的细胞个数。然后用下面的公式计算9 G  x! e8 k8 [: g; i2 a
X/4* 2*10000*40
1 z$ T2 q5 G4 N) ~. {7 h注：X是4个大格子总的细胞数，2是稀释倍数（和胎盘蓝等量混匀，等于稀释了一倍），10000是固定的，40是总的细胞悬液量40ml。
; Z' i" M! m( t4 F* {0 a* ~6 ?9 N各位高手能在详细的解释下这一点吗$ C% K. ]( G! T& Q3 z

上帝帮我转运吧

2 p2 _  \2 Q& ~* a# W% \6 b
3 N' z& D! r3 D% L' w应该是想知道那个公式导出吧，我好像 记得是：X/4(每个大格子里的细胞数)* 2（稀释倍数）*10000（每个大格子的容积0.1ul折算成1ml时的倍数）*40（总体积） 8 @$ V9 O( z& Y) v
0.1ul=1mm长*1mm宽*0.1mm高
" i" U6 N; C8 X 7 b, u5 R# x  x! G5 `& W

amphioxus

血细胞计数板是很常用的啊，下面是我学习计数的时候用的资料。另外计数时最好有个手动的计数器，数一个记一个，这样不容易记错。

yanwu_1

计数板的准确性，关键还是看计数时的操作：首先，细胞悬液应进行适合倍数的稀释，最好使四个大方格的细胞总数在80-120之间，这样细胞分布的均匀；其次，细胞总数应该大于1*104/ml；其次，重复2-3次，结果取均值。