关于脂肪来源干细胞的计数问题，请注意细节操作！

相宜

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! `6 D3 V- U9 D7 F最近在做有抽脂病人腹部提取出来的脂肪干细胞，关于干细胞的技术问题，我们实验室设备有限，就买了两块血细胞计数板，请教各位高手这种板子是否可行，具体操作步骤请各位大侠不吝赐教。

xiaf_0

很多实验室都用这个。具体方法如下：$ X" Q- u* e  v
1.以40ml细胞溶液为例，先将细胞混匀成单个细胞悬液6 e  A. j% n9 Y
2.准备细胞计数板，用75%酒精将计数板冲洗干净，然后用一干净的盖玻片盖在中间的计数区。
4 g/ D& e( a3 b# U/ ^4 t8 ~, w3.取0.02ml细胞悬液和等体积胎盘蓝染液混匀，注意胎盘蓝要配成工作液，稀释倍数看说明书。" f, h8 }/ P7 P  {  i8 q
4.用10ul的移液器取混匀的细胞悬液(胎盘蓝和细胞溶液）从盖玻片边缘注入。每个技术区的体积就是10ul。
; K/ v& k  E$ W; J5.在显微镜下开始计数，数4个大方格的细胞个数。然后用下面的公式计算
% P' Q2 e: n# E2 x4 H$ E( CX/4* 2*10000*40 # _2 k' O) L! M$ T! e: a& ~( e! Z
注：X是4个大格子总的细胞数，2是稀释倍数（和胎盘蓝等量混匀，等于稀释了一倍），10000是固定的，40是总的细胞悬液量40ml。

zz091115

这个东西计数要是数的好比机器技术准

haibara007007

用板子自己计数要比仪器准的多，只要注意细胞浓度就没问题

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回复 xiaf_0 的帖子+ x; s& J+ C2 x& k) {! e1 l* Q

( s4 t" B/ W4 S6 c7 r, p0 L非常感谢大侠的详细解答！

tinatina

另外强调一点，计数时应做至少两个重复计数，取其平均值。台酚蓝我们买的是已经配好的工作液，直接1：1就可以，不用再稀释。自己的细胞样本稀释浓度关系很大，两个浓度计数可以相差很远。

相宜

5.在显微镜下开始计数，数4个大方格的细胞个数。然后用下面的公式计算
" ]( W# R4 {" Z, yX/4* 2*10000*40
# r$ W. D6 C5 w注：X是4个大格子总的细胞数，2是稀释倍数（和胎盘蓝等量混匀，等于稀释了一倍），10000是固定的，40是总的细胞悬液量40ml。: t" I3 ~. l3 O) m( j# C. I
各位高手能在详细的解释下这一点吗5 _1 u$ i" ?% x8 r; F# b' S

上帝帮我转运吧

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' V  H+ \" w7 q" n
应该是想知道那个公式导出吧，我好像 记得是：X/4(每个大格子里的细胞数)* 2（稀释倍数）*10000（每个大格子的容积0.1ul折算成1ml时的倍数）*40（总体积） & e8 M$ m% x: U8 `# v% v1 M/ X) H
0.1ul=1mm长*1mm宽*0.1mm高" Y8 ~/ B" D, \& |% V! H
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amphioxus

血细胞计数板是很常用的啊，下面是我学习计数的时候用的资料。另外计数时最好有个手动的计数器，数一个记一个，这样不容易记错。

yanwu_1

计数板的准确性，关键还是看计数时的操作：首先，细胞悬液应进行适合倍数的稀释，最好使四个大方格的细胞总数在80-120之间，这样细胞分布的均匀；其次，细胞总数应该大于1*104/ml；其次，重复2-3次，结果取均值。