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- 积分
- 372
- 威望
- 372
- 包包
- 605
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实验过程:
# O, @( G9 A$ ^) s. ?- G* e. v待细胞融合达80%,接秋水仙素到培养瓶中终浓度为0.2ug/ml,孵育4h;
, |. a' E% b2 F6 V收集细胞:0.25%胰酶消化,137g,5ml离心管,1500rpm离心5min;
& {$ o8 |1 M$ y2 y. E2 W低渗透:细胞沉淀用0.075MKCl(已预热)重悬,再补足至5ml,用枪头轻轻吹打,37度水浴孵育20min;$ W: @: t, @3 d) i
预固定:加200ul新配固定液,137g,1500rpm离心5min;
3 E. F9 l, j: P' |7 K固定:细胞沉淀用新配的固定液重悬,过夜固定;
6 O+ {" \6 {5 L0 }' F重复固定:137g,1500rpm离心5min,重复固定两次;/ ~6 S% L7 D) }% S- w
细胞沉淀用200ul新配置固定液重悬;
8 Q( ^2 e6 p6 E% ~4 w P近距离滴片(冰片);
' f9 o: E O/ ~, n! P90度水温,蒸汽熏蒸30s;& N u4 _$ @) y2 s( c) F7 g
火焰上固定5s,吉姆萨染液染色;
# B0 \( p' ~ ?! `1 L镜检 |
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总评分: 威望 + 5
包包 + 10
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