关于DC-CIK共培养

yanlu98

给位前辈，我想向大家请教一下一般DC在培养后第几天和CIK共培养，共培养时怎么收集DC，我看到以前的帖子，有前辈说用冷盐水冲，为什么要用冷盐水呢，那是多少度的盐水？而且用盐水冲过了之后要离心再把细胞收集起来移到CIK里面吗？希望各位前辈不吝赐教，越详细越好啊！

大少爷

DC细胞培养第六天/第七天，在显微镜下观察细胞，细胞变为毛刺状悬浮细胞，终止培养。
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5 V+ _* u( c5 W* _9 W5 G+ l2 `1 wDC细胞收集：将贴壁细胞培养瓶中的培养液混匀后，转移至50 ml（或250 ml）无菌离心管，. T3 Z2 ?' }3 G# E- p* W# _
立即向培养瓶加入10ml 4℃预冷的生理盐水，迅速晃动和吹打，立即移至离心管，重复上述步骤，
$ p$ W; f. G7 @$ N4 O4 C, z直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止。
$ W* h5 k9 c7 g# [, X1 ], I- p: M将收集好的DC悬液离心（300g，12min，RT）弃上清，用移液管加生理盐水将细胞液稀释，5 o0 \/ Y$ q1 o/ P' \9 k3 w
混匀，离心，上清去掉，用培养基重悬细胞，加入悬浮培养细胞中与悬浮细胞共同培养。8 [8 b* w  Y. b7 U; R

1 {) Z% @% {* w, {0 N8 ]冷盐水刺激DC细胞收缩，便于从培养瓶上脱落，也容易吹打下来。不能用细胞刮刀或细胞消化液，对细胞损伤太大。

yanlu98

回复 大少爷 的帖子
" u/ }& \& `7 k
6 n( G" \, }' q  F3 b非常感谢大少爷！！

yanlu98

回复 大少爷 的帖子6 H1 H) I6 q" a0 @- f) Q
6 c) `$ r( m4 v' J* j! A, Y
还想问一下大少爷 你说的“直至在倒置显微镜下观察，绝大多数为贴壁紧密的细长梭形细胞为止”，那剩下的梭型细胞是什么呢？还想麻烦你能不能发几张你养的DC给我学习学习呢？

yanlu98

回复 大少爷 的帖子* G6 Y, I, P9 x1 ~- f' c- [
0 d  K9 K9 o6 d0 B9 |/ d
还想请教一下大少爷，用冰生理盐水冲就是为了让细胞收缩，那我直接用4度的1640冲，冲完了直接加进CIK里，就不离心了，可以吗？

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,0 l. P% L- g% J  C" O8 P
你真聪明

大少爷

我没试过,不知道效果怎么样,你可以试,然后告诉我效果,1 v- C8 Q* N# H3 t# F: T
你真聪明