293T细胞团中央黑色不明物

telomerase

铺匀的方法有好多，个人有个人的) U4 R  \9 q9 u
1、晃板子，就是前后晃完，左右晃，然后突然停* S& R0 @3 O! V; M6 l0 X3 @0 K1 l4 w
2、先湿润板子，然后铺1 K# D1 a7 p) e
3、直接铺，然后用枪头吹+ Q4 W3 C# c* s
4、完全消化，直接加入，铺满底面就好
6 m/ _7 G/ a5 s& Q# t' D
: @( x% }; ?- }9 B2 ]4 w- `( _0 `% @3 r- h  @9 r
这几种我都做过，但我比较喜欢第4种
) r+ l+ k6 P4 m( d/ e" z4 ]# K你得找到你自己觉得好的方法，这些是和各自的手法有关的，没有绝对的东西

telomerase

不加双抗的
# p! J: j+ e* ^转时可以用有血清的培养基，但混合质粒和lipo的最好用减血清的opti mem

telomerase

转时不要加双抗，对细胞不好
5 E: n: w8 \) |如果6h后换液，再加不加双抗没关系了就

sizhengliu

回复 telomerase 的帖子& R) t2 k$ U' H; T4 ^

1 @0 F* a/ f5 X# I) j; ^1 c. G2 H多谢指教！

huangcong1988

回复 sizhengliu 的帖子
7 `: s: ^* d8 p. k2 Y+ k, T# ]' }& a) y+ l5 \6 X/ d+ p
个人觉得是消化传代的时候没有吹打均匀，然后传到瓶里没有摇匀，这样细胞很容易扎堆，导致细胞形态不好，还有你的细胞哪里的？是不是传代太多了？

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子
# S  a: e. k' F! E5 I0 m! b8 n  F  D! M+ U; a% \& Y  {2 r- u8 g: n8 B
放置几分钟，细胞仅轻轻贴壁，你拿起放到培养箱的时候的动作肯定会把它们晃起来。你可以让它们贴个半小时让它们贴壁比较紧之后再去动它，或者直接在要放的培养箱里按照常规的方法晃匀后就不动它了。

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子5 x& }) ^7 Z' `; S

& W1 k/ d! [2 R. }质粒转染的时候不加血清，一般转染4小时之后把含质粒的转染液丢弃，再加入含血清和双抗的培养基培养就可以了。

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子3 G, Y  `+ x/ X$ r, K$ |5 M
& F" D4 h; G5 c4 b- L( g
谢谢！

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子
! o- r. M! T3 Q8 }/ T4 ?, \. O2 v' Z) n0 }
谢谢！我下次试试

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子
' d' F8 F8 {+ O3 m9 j% k1 \
5 d) I& N8 w: Z) @+ _# V我把细胞直接复苏到孔板里，或许这样太急了吧，以后可能会先在瓶里传个1、2代。