293T细胞团中央黑色不明物

telomerase

铺匀的方法有好多，个人有个人的
3 `- ^8 C% q- Q, ~6 M1、晃板子，就是前后晃完，左右晃，然后突然停
. r* Z9 z1 F) p2、先湿润板子，然后铺* x6 x! C, g! m/ `6 l- U( D  o
3、直接铺，然后用枪头吹! ?3 Z8 x$ B  N/ E4 r
4、完全消化，直接加入，铺满底面就好
  E; t4 P) R8 W/ u% v5 Q: V4 I2 x4 y- j" T; @  C% E+ d

" G; ]& X, L- R: r5 R这几种我都做过，但我比较喜欢第4种7 s/ c1 P' x7 v4 ~1 Q! p1 K- _
你得找到你自己觉得好的方法，这些是和各自的手法有关的，没有绝对的东西

telomerase

不加双抗的# Q% n5 [/ C0 K3 b+ D; P
转时可以用有血清的培养基，但混合质粒和lipo的最好用减血清的opti mem

telomerase

转时不要加双抗，对细胞不好
1 \0 t6 e! ]; F& W- k! d如果6h后换液，再加不加双抗没关系了就

sizhengliu

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: w+ h- J; S/ Y
# m* U( t6 }& r% U2 d+ P多谢指教！

huangcong1988

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+ u! b2 c4 k+ z; r0 ?6 ^1 z
个人觉得是消化传代的时候没有吹打均匀，然后传到瓶里没有摇匀，这样细胞很容易扎堆，导致细胞形态不好，还有你的细胞哪里的？是不是传代太多了？

wcfeng88

回复 sizhengliu 的帖子7 U! u# @% u3 l. u* S

5 B9 a: H2 p9 D8 u$ z- p& u放置几分钟，细胞仅轻轻贴壁，你拿起放到培养箱的时候的动作肯定会把它们晃起来。你可以让它们贴个半小时让它们贴壁比较紧之后再去动它，或者直接在要放的培养箱里按照常规的方法晃匀后就不动它了。

wcfeng88

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% T  E3 W2 ~2 s& Q' m4 d1 h; P% d& O
" b6 j2 j; ^7 ^3 n' f! [: |质粒转染的时候不加血清，一般转染4小时之后把含质粒的转染液丢弃，再加入含血清和双抗的培养基培养就可以了。

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子' o2 A$ f- z( z$ C  I! k5 Y7 h4 a

3 Q: g( D" Q  @8 M& _, s, s" h+ b谢谢！

sizhengliu

回复 wcfeng88 的帖子0 [: i& c& C1 D9 P
4 R* |$ ~8 D; f  j3 a
谢谢！我下次试试

sizhengliu

回复 huangcong1988 的帖子0 O9 b' X& q0 P, s  s6 y

2 y" q6 g  c% M# D$ z0 V, _. I, z我把细胞直接复苏到孔板里，或许这样太急了吧，以后可能会先在瓶里传个1、2代。