细胞刮刀的问题

camus

最近养人跟小鼠的骨髓间充质干细胞，从0到现在，虽然养的还不好，但是比刚开始有了很大进步，在这个论坛，得到了大家的很多帮助，在这里先谢谢各位前辈细致耐心的帮助！！！/ l5 K% r- {" z6 l" V
我细胞原代提取现在没有问题，但是在传代的时候不是因为胰酶消化时间短，细胞还贴壁不下，就是因为消化时间太久，细胞传代后形态不好，老是掌握不好消化的时间。8 [+ r- U* H' k* o
1：请问两种细胞消化的时间一般都是多少？' i* @5 e; u2 W8 [
2：问过科里的老师，有人建议我用细胞刮刀去进行传代，请问有大神这样做过吗？有的话请问用的是哪家公司的细胞刮刀？
$ e, |- I& J# Q) m; U3：我用的都是全骨髓培养法，靠的就是传代的时候来纯化细胞，请问如果用细胞刮刀的话，会不会影响细胞的纯度？
5 q3 r; H4 h/ o8 V. V4 v' T" _! f; R谢谢~~！~

gengtongyu521

Corning的刮刀挺好用的。不会影响细胞的纯度。

飞翔的十字架

如果怕胰酶消化时间过长而影响细胞状态首先注意胰酶的温度或放置培养箱消化；细胞皱缩变圆后采用磕瓶子的方式加速细胞脱落；还有就是换专门的间充质消化液，当然比较贵啦；刮刀没用过....

camus

回复 gengtongyu521 的帖子) j) T1 E; _$ ~

- b8 s' Z/ _% z% Q请问挂下来的是片状的吧？细胞吹不散怎么办啊？有没有什么好方法？谢谢~

daviddow

老鼠的细胞养个2.3代估计就不行了。本身的原因吧。

asa_ok

胰酶浓度如何？一般37度下三五分钟，足够了；或者在常温下，边消化，边轻轻吹打，并镜下观察细胞，如果细胞浮起来，可以终止酶消化了。1 u. x; T7 k9 E: m4 L+ s* g
用过某公司买的刮刀，几次后就不好使了；可以DIY，横切楔形塞一片，四等分，然后镊子夹着就可以刮起细胞了，但主要适用于培养皿中贴壁较紧的细胞

gengtongyu521

回复 camus 的帖子
5 ?# o/ Y) f+ i: ]6 }# B- x4 E. P' _2 U' I5 @! |- g/ D
细胞刮下来后，一般用移液管是可以吹散的。

sandrazz

一般放37度培养箱2-3分钟就可以了7 n( x% Q, t6 [( i2 \" x" }
可以用枪头刮，但是就是不好控制，有时候会刮的太碎

crazytime

加了酶后，试试拍打下瓶子可以用力点

camus

回复 daviddow 的帖子
$ w* j, |- y3 T& D* @* s
" V9 M. F$ o0 K4 g& S: S  q恩，现在细胞老化严重，下面还要做转染呢。在想办法ING