UBMC复苏产生絮状沉淀的处理

lixuejia

       冻存的UBMC复苏后，往往会产生白色絮状沉淀，这种沉淀在复苏后会产生，即使复苏后很少，在进行MACS磁珠分选加入磁珠孵育后，也会产生絮状沉淀，严重影响UBMC过柱，并进入影响分选HSC的百分率。
- J  l: J& `! T/ I      絮状沉淀到底是什么呢？？我们认为主要是红细胞和粒细胞裂解后的产物（UBMC中含有的网织红细胞和粒细胞很难通过Ficoll法完全除去），可能包括DNA和蛋白，如何除去这些沉淀，而又不伤害UBMC中的HSC，是一个难题。
. ?4 A6 f0 q; N" F0 M      目前，我们课题组先后尝试了胰蛋白酶、DNase1、胶原酶（1和4）溶解沉淀，都没有明显的效果；同时尝试了冻存前裂解红细胞法，结果沉淀物产生的更多。
, F+ V- A+ D; R& @5 D     因此，对于从事脐血干细胞分选的科研工作者，希望大家多尝试，有什么好的方法一起分享，争取攻克这一难题。加油！！！
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lazyworm

细胞滤器过滤行吗，会不会把细胞滤掉。

lixuejia

我们也尝试过用70微米和40微米的滤网去过滤除去沉淀，其弊端有两点：1）只能除去部分沉淀；2）细胞损失很厉害。所以，这种方法是不可取的。

linzi214

我们做流式是用荧光染料标记的，上机前200目滤器过滤，不值楼主的可不可行

lixuejia

回复linzi214:  200目换算成微米是多少？问题的关键是：1）将沉淀溶解掉，2）避免沉淀的产生。因为过滤法即使成功，但沉淀物网络掉的UBMC也随之损失了，而且这部分UBMC的所占额比例很大（甚至超过50%）。

细胞海洋

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细胞海洋

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看5楼

linzi214

回复 lixuejia 的帖子
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200目是指每平方厘米有多少个孔，筛孔直径约为0.074mm（http://wenda.tianya.cn/wenda/thread?tid=2918f2f6eb300424）。我们做流式人原代树突状细胞、体外培养的正常和癌细胞一般都用这个网筛过滤的。不放心的话，可以先尝试，选用合适的孔径的细胞筛，过滤后重悬取一滴显微镜下观察有没有细胞，就知道行不行了，关键是要把成团的细胞和絮状沉淀过滤掉，要不然机子会堵的

lixuejia

回复 linzi214 的帖子, \$ `0 |% P2 m( y) I

1 [: `3 `7 W2 h! v  t7 v" R谢谢你耐心的回复。现在关键问题是，这些絮状沉淀很黏，如果只是过滤除掉，同时会将沉淀网络到的UBMC过滤掉，造成UBMC的损失。所以，我们想如果避免沉淀，或者将沉淀融掉，释放UBMC.

linzi214

那样的话建议分两批处理：先将未粘附的游离的UBMC分离出来，剩下成团的絮状沉淀可以尝试机械吹打或者胰酶消化的方法看看行不行。如果一起处理的话，细胞折腾的次数越多细胞活力越差