高手请进！脐带间充质干细胞组织块法分离失败。第3-5天组织块间很多膜状沉积，求解...

quge_00

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0 b! Y& Z1 ?' p, m, n# o其实不用显微镜反而能看出来~~~- g" r4 a* I! f( Z" s/ z! O- L
显微镜已经不能透光了。。。, l3 i9 m2 E; x$ }" j7 W8 Z# T
不是霉菌污染，霉菌培养液比较清；像是细菌污染，浑浊的很，皿底一层粉红色细颗粒状的沉积层，可以晃动，像流沙一样，不知道是什么细菌。。。反反复复污染的就是这一种，很好奇是什么细菌~~~

zhang0194

看了你的图片，组织块有点大，密度也大，几乎组织块之间没有间隙，细胞游离出来很困难。
( M3 E7 q9 [+ Y+ A/ r& R 建议你把组织块剪碎至 3-4mm大小，每块组织块相隔1CM 左右铺展，尽量使组织块和培养瓶全接触（用瓶子吧，平皿容易污染）。5天换液，10天左右就长出来了。

quge_00

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) w% C) k6 ~+ S. o- @) T$ V& u* p, {
培养瓶的话组织块很难排列整齐啊，# _* M) }3 f5 }) N3 j
瓶口感觉也容易配污染呢。。。) r! f7 d, b6 M. E3 h, i
你有什么小窍门吗？

zhang0194

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8 k) t& T) D& C3 ?% C" R  N, Z) d: w; i. f# N
用5毫升的移液管拨，别用太多的培养液包被，24H后在添加培养液。

quge_00

回复 zhang0194 的帖子4 n7 X2 J  y- E# F

, N5 B* p5 J/ x! d8 y& a1 i是哦，这样一来挺不错的，下次试试培养瓶~~. e% B5 T# M8 x7 L  Z
我们实验室都是10ml的移液管，买点5ml的试试~~~, l9 a. v; g5 h
谢谢啊~~2 A! S: i9 ?4 [

ld2069

考虑为污染可能性比较大，脐带运输过程中是否存在某些环节容易造成污染呢？以及处理过程中的污染问题。

透明之蓝

1.真菌或细菌污染？# O4 v& K1 N8 H' x
2.血细胞多？! k/ D% x: q" T; X+ n# s) h
第一个可能性较大

透明之蓝

- H2 s" d1 f% b
- g* n) @8 G) l8 I3 y( k回复 quge_00 的帖子% u- N# Y% M* m- B; Y3 ?
  U3 J2 D  w% k: T/ _
这样，来的脐带，直接上双抗太弱了！
3 r( }- ~, A+ x( H) p; ^( c现在剖腹产的多，顺产的少，剖腹产的时候，是由外科来负责，和产科无关。
) e! s/ x2 b) f7 b; W+ q而胎儿娩出后，因为你拿到脐带都是“偷偷”拿的，所以产科医生和护士没法立刻进行处理，他们还要测量胎儿的一些参数和对胎儿、产妇进行处理；而外科的护士一般都会把产科检查后的胎盘（包括脐带）直接扔到手术室的地上，虽然是等级很高的层流净化实验室，但是也是有细菌的！等到你拿到脐带的时候，通常都是污染的！' o  P, J" F+ r0 D: F4 J6 A
这个时候，先把脐带用生理盐水冲洗干净，然后整条浸泡到75%的酒精中，10min左右，然后拿出来无菌条件下剪成2-3cm的长度，再用新的75%酒精洗去残留的血迹，挤出血管中的血，然后直接剥皮，这个时候由于酒精的浸泡，外皮会皱缩，也有利于剥皮，先剥去外皮，然后除掉静脉（最大、最薄的），然后是2个动脉（很好去除，放在后面剥离），然后撕成5*10-20mm的大块，贴壁培养即可。剪的太小了，加培养基或者补液、换液时容易漂起来·，就白费了~~+ C# w3 S/ H6 {& ?1 o
后续培养基中原代培养还是添加双抗吧，后面再说~~

透明之蓝

回复 quge_00 的帖子% i% S/ q, T( S. L0 p  z/ u
$ P. e/ r4 y6 w0 j6 w, Y: }+ C0 j
买些血平板，很便宜，几块钱一个，每次配液做个质控！

quge_00

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, @! v- I8 i% p6 }0 e
# z. _' A+ X0 v* w6 t' a受教了啊~~~' t* m5 D. g1 s$ Y+ r
我现在已经开始用酒精消毒脐带了~~
% a% ]- J0 W1 j( |! ~. [4 m基本没有再出现过污染了~~
% x0 u' T$ O$ O5 I- Q3 i0 V7 t$ n; k5 E+ k8 G! y