泪奔，细胞还没是没有长出来！！求前辈指点啊！！！

小猪快跑

你那GIBCO干粉配制的培养基是高糖的还是低糖的，看看你的配方里的成分，此条仅作你的参考！

evial

800g这么高！约算下来大概3000转啊，细胞可能会碎掉或损伤。
/ |3 K' [+ e9 s! Q$ g& U成糊状怎么可能离心下来？你不加液体么？

evial

800g这么高！约算下来大概3000转啊，细胞可能会碎掉或损伤。* c1 c# ?" C) n. c  p/ w
成糊状怎么可能离心下来？你不加液体么？

sunflower636

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0 x. {$ N. E2 c( s
. P6 I! {, N1 }  D8 A800g??那最后一般是把组织消化成什么样子？汤状？之前剪的时候是完全剪碎吗？1mm的样子吗？如果没有剪这么碎会不会影响？

sunflower636

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6 G. j, _" |2 S4 }; d' s3 v* w( F9 J+ T: f! }: @' G0 b
哦，可能是我形容的不当，应该是消化成汤状，就是已经看不到一粒一粒的脂肪组织那种了。其中的结缔组织完全被消化下来了，所以离心的时候它们搅在一起，我都是在离心后用吸管把它吸出来，然后倒掉上清。

cuiyongcuhk

我觉得楼上有些道理，楼主再试试。

stemcellmeng

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+ a+ X  d$ b0 Y& {& K1 z  h+ F% ]8 {' O% C6 p
不是汤状，是剪得碎一些比较好，能剪多碎剪多碎，但是不要剪得时间太长，否则在外面时间太长细胞损伤太大，如果实在剪不到那么碎也可以，反正总会消化下一点细胞来。消化完以后，白色的脂肪会漂浮在上层，下面的液体由于细胞在里面会略显浑浊，还有一些组织小块如果MSC含量高的话就会沉在管子底部，一般颠倒一下对着光还能看出沉降的细胞。如果你觉得800高了可以降一下，用600g，10min试试。

zmm

回复 sunflower636 的帖子) q& h6 H9 i/ r! e; E  u
2 E1 c0 j! B& t
1.你消化时间太长了。大概在30min左右就可以了吧。: y. U  \5 M8 a, X/ a  g
2.消化时要加一些DNA酶，防止消化出DNA粘连一些细胞。
# Y0 N  i1 n9 l: g% R& O3.培养基体系不太好，这应该是非常关键因素。
% b4 B2 y9 L2 f6 J) H! ]3 Y4.没有终止消化。

sunflower636

回复 zmm 的帖子; v3 w/ p: V. ~( H2 `

+ [, g! S" ^8 k嗯，我已参照各位的意见做了些调整，期待我的好消息吧！到时候传图上来。

sunflower636

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" s2 q! n& a; x, r6 s7 s0 d) T3 k- U
嗯，貌似结缔组织也被离下来了，所以瓶底一堆东西。不过我最后制成悬液的时候用筛网过滤了。