泪奔，细胞还没是没有长出来！！求前辈指点啊！！！

小猪快跑

你那GIBCO干粉配制的培养基是高糖的还是低糖的，看看你的配方里的成分，此条仅作你的参考！

evial

800g这么高！约算下来大概3000转啊，细胞可能会碎掉或损伤。. U6 V# p8 g$ O! f% c! B! u1 l
成糊状怎么可能离心下来？你不加液体么？

evial

800g这么高！约算下来大概3000转啊，细胞可能会碎掉或损伤。- h" W' S! z9 n# K; q% Z
成糊状怎么可能离心下来？你不加液体么？

sunflower636

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) a8 t5 ^: j1 g/ c" K
, y) u+ M. x5 D% ?! u800g??那最后一般是把组织消化成什么样子？汤状？之前剪的时候是完全剪碎吗？1mm的样子吗？如果没有剪这么碎会不会影响？

sunflower636

回复 evial 的帖子  N7 o" w% s+ m( C8 z( B: I6 U
& z/ Y+ d) Y$ T1 ~! Y. ?2 A' m( J
哦，可能是我形容的不当，应该是消化成汤状，就是已经看不到一粒一粒的脂肪组织那种了。其中的结缔组织完全被消化下来了，所以离心的时候它们搅在一起，我都是在离心后用吸管把它吸出来，然后倒掉上清。

cuiyongcuhk

我觉得楼上有些道理，楼主再试试。

stemcellmeng

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: @' V: {7 B2 Y+ {+ E
5 c9 w/ ^8 J5 x9 e% o' P: t不是汤状，是剪得碎一些比较好，能剪多碎剪多碎，但是不要剪得时间太长，否则在外面时间太长细胞损伤太大，如果实在剪不到那么碎也可以，反正总会消化下一点细胞来。消化完以后，白色的脂肪会漂浮在上层，下面的液体由于细胞在里面会略显浑浊，还有一些组织小块如果MSC含量高的话就会沉在管子底部，一般颠倒一下对着光还能看出沉降的细胞。如果你觉得800高了可以降一下，用600g，10min试试。

zmm

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: I$ s* p: j0 w" x8 ?1 n+ L. f  ~6 ]- P$ h6 k& K* y
1.你消化时间太长了。大概在30min左右就可以了吧。
* w* F7 H  \# f" b) f8 W2.消化时要加一些DNA酶，防止消化出DNA粘连一些细胞。
6 ~# Z& V" \- c& d8 x$ X3.培养基体系不太好，这应该是非常关键因素。
- e" V+ l/ E& O$ T3 [, `: ]: R4.没有终止消化。

sunflower636

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! @# U3 h9 Y4 ], g9 B' c9 q, J$ J+ ~: c! n8 I2 Y
嗯，我已参照各位的意见做了些调整，期待我的好消息吧！到时候传图上来。

sunflower636

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# X3 v2 g/ r1 G1 w  o$ q+ R9 L. x0 _6 h
嗯，貌似结缔组织也被离下来了，所以瓶底一堆东西。不过我最后制成悬液的时候用筛网过滤了。