泪奔，细胞还没是没有长出来！！求前辈指点啊！！！

lingminliang

我们一直做的是小鼠的 你这个做的是人的ADSC吧 反正我们做得小鼠的是 我们胶原酶消化30分钟 放在37°水浴锅，5分钟摇一次就行了，1000转10分钟。消化的时候加了一些DNA酶，防止粘稠，没有加红细胞裂解液这一步

wiling123

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4 L3 m- v" ]% h: V; j+ ]7 m( H; `, f) @* H, Q0 B
你好，我最近也在做小鼠的，可是养的细胞不好，传代之后老化严重。请问你有这个问题吗？

sunflower636

回复 lingminliang 的帖子" Z0 e: @  V( p6 @. p

9 g$ x; ]7 B) V3 {! U一些酶？具体的量是多少呢？

相宜

我说说我自己的经验：第一个离心为800r，第二个离心为1000r，最后还有个100目滤网过滤的过程

相宜

另外，培养基你配的是那种的，保险起见你直接买一瓶进口的，50块钱。你那么贵的进口材料都用了

lingminliang

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/ m3 B3 S$ Z. ]& n' n
, w5 W# f5 h, j+ h; Z8 O+ q200ug/ml  的200ul

lingminliang

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7 l' D+ S- p6 z2 e( T7 y' D
" A6 }7 N  y9 f8 M1 m! Y这个也有， 而且第一次传代的时候很难消化下来 有好方法吗

yangwy028

每次用酶，用裂解液都不提起终止的事。当然细胞就没法好好存活了，你倒是在每一步操作过程中取样看一下细胞形态和活率不就知道问题出在哪里了吗？

sunflower636

回复 yangwy028 的帖子2 M8 {# w  M  F4 |8 P/ m$ e

" w6 |. m4 \8 s9 O: k. Y4 {胶原酶用血清中止不了，裂解过后是应该用PBS清洗一下。根据各位的指点，上周做了一次，终于看到细胞啦，但是数量超级少。

sunflower636

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! j! m8 \+ A3 M: t4 N6 |$ C2 J( O培养基买的是GIBCO干粉配的DMEM:F12。后来买了HYCLONE的，准备下周用。上周又做了一次，终于看到细胞了，但是数量特别少。貌似长的也不快。第4天才看到梭形贴壁细胞，然后增殖的也慢。