再发图！用Ficoll分离脐血后的效果（15ml和50ml离心管）

pailishi

我跟你一样分的，但是我用EGM-2要养的是EPC ，最可恨的是经常被MSC克隆污染，而且这个MSC克隆增殖奇快无比，头痛！！！

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-7 17:13 ! t& M. x8 y' `! u& K& X' N" P5 ~
我跟你一样分的，但是我用EGM-2要养的是EPC ，最可恨的是经常被MSC克隆污染，而且这个MSC克隆增殖奇快无比， ...

( F! ^! z& k, v+ RMSC在EGM-2里养的活？其实应该养的活，只要血清好。
$ o9 v& x  d* P" o' s: N" K你养EPC可以试试脐带的或者外周血的嘛！那样被MSC污染会低一点！
$ A+ {" f+ \( D. z/ ^( l: R5 N$ b哦  对了  你用的EGM-2里加什么生长因子吗？血清用的啥牌子的？我以后可能会要养EPC9 Q! i" a/ g, `8 L3 ~
请教了！

pailishi

EGM-2用的就是商品化的成品，相关因子和血清都是配套好了的哦6 @$ H4 L% B( a8 B7 r  O+ F, E, B5 _
脐带里面的指的是脐静脉内皮细胞吗？外周血EPC含量太低，很难养出来

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-8 09:03 . j, w3 ^% D3 l2 [0 x5 W7 G: b
EGM-2用的就是商品化的成品，相关因子和血清都是配套好了的哦
. J+ Q$ _& J& m( g$ m' {脐带里面的指的是脐静脉内皮细胞吗？外周血E ...

: |2 A/ Z. H# M; s# X5 r$ W
嗯，就是指脐静脉血管内皮祖细胞。外周血的EPC含量的确比较低，不过我印象中看到一篇奥地利的文献是关于外周血大量扩增EPC的，现在一时找不到了。。。

pailishi

呵呵，我们还是想要脐血EPC，主要是MSC克隆污染的问题，其他还好，不过有点觉得EGM-2的质量不稳定

pailishi

有一个带视频的关于外周血大量扩增EPC的文章吧，有点难度

huajie881026

pailishi 发表于 2012-8-8 10:45 / |3 j9 W3 Q/ j) v5 K/ b
有一个带视频的关于外周血大量扩增EPC的文章吧，有点难度

% p, t% q1 j, o; O刚搜了下JOVE，看了那个视频，震惊了，最后她用的扩增细胞的培养容器也太大了点了吧！不过她说成功率有50%-70%，只是主要取决于供体血中有无EPC。& d! }2 |/ P0 a# I5 I
以后如果我也要养EPC，还望你指点啊！

vanessa

你用的Ficoll也太多了吧。我们一般稀释过的血：Ficoll=2：1.我觉得操作的时候注意缓慢将稀释后的血细胞加入到Ficoll中。加入之后尽快的离心，离心的时候升速和降速都慢点，应该会好点

huajie881026

vanessa 发表于 2012-8-8 16:37
$ s. I3 W7 O# Z, P你用的Ficoll也太多了吧。我们一般稀释过的血：Ficoll=2：1.我觉得操作的时候注意缓慢将稀释后的血细胞加入 ...

0 u  ]0 }" w/ a, h' o6 Y
因为说明书和论坛里都是这么做的，我也想省点ficoll，以后我就按你的比例吧。。。

huajie881026

透明之蓝 发表于 2012-8-7 16:41
# R+ Q8 O8 `( ]同样的分离液，15cm的肯定分离效果更好。+ s1 u& `; {. g) ~0 V( ~
肯花2000元买分离液，看来你是在搞科研，而且，脐血的MSC含量 ...

5 b9 ?/ U1 @: o# ^
出来了一点梭型细胞（有待鉴定），但是杂细胞很多
1 L5 _# d* o- @* k7 whttp://www.stemcell8.cn/thread-59259-1-1.html