求诱导人的细胞为ips细胞的培养基？

xiaoya

想请教一下各位朋友，在做人的细胞诱导为iPS细胞的过程中，大家用的哪种诱导培养基啊？我见文献里面用的如下试剂：  [9 \6 Q! C: g7 H
1.Konckout-DMEM
% x' _/ p$ W# }/ b# R2.20% knockout serum
4 i' b2 W4 \3 k" B. o6 y0 o. j' y8 ?( N3. 1% MEM nonessential amino acids
2 Q# I5 [; y# j8 I7 H, R4.10 ng/mL bFGF
8 o& B7 s+ w- L3 D$ ]3 {% f3 s5.1mmol/LglutaMax3 x) j4 S9 g  U5 y' j& k& l
6.1mmol/Lsodiumpyruvate
6 f9 x  S1 q8 y. K' j: I% S但是我问了一下公司，他们说有专门卖诱导ips细胞的培养基，100ml要两千多，太贵了，我想问一下大家用的那种培养基能够诱导成功？
8 @; }" w4 ~% k" f0 ~# h& l1 Y( a) `0 e1 G# F/ @
% `, p7 G6 F* A: n
另外，先用人的细胞来诱导为iPS细胞，大家选的MEF是哪种啊？因为我们这边没有卖CF-1小鼠的，我想问一还可以用那种细胞做MEF?非常感谢！

lingminliang

诱导ips细胞的培养基我们有买过，现在也在用，但是没那么贵啊，200ml的才2000多一点点，MEF的话ICR的小鼠也行，但效果肯定不如CF-1的，我们之前买过CF-1的原代细胞，回来自己扩增之后再做成feeder

wangshumin12311

做病毒的话，你也可以考虑无feeder，Matrigel包被，细胞长满了不用传代，，DFBS medium（20%DFBS,DMEM高糖,8ng/mlbFGF,NEAA,GLN)，7-12天后换你写的Konckout-SR培养基（适用retro/lenti 四因子 fibroblast，不同细胞不同诱导重编程方案体系都不太一样，需要优化）

sizhengliu

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0 R0 O* {! w2 R! X7 j/ I: [
, E+ x4 \/ b1 j, k你好！细胞在Matrigel上长满了不需要传代吗？或者你有别的操作？

wangshumin12311

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3 v" O; O* f' F% m  _
. b' s+ h. t5 x4 |! l3 y不传代，并且加了KSR培养基会大量细胞死亡，届时二三十天克隆长得比较大而稳定，挑到MG上用mTeSR1培养就行了

sizhengliu

回复 wangshumin12311 的帖子: q' f6 m( A1 j( }/ a/ P

6 Q6 F0 _. T) `* D9 B谢谢分享！我也觉得KSR加上去后细胞漂浮的比较多，不知道是不是KSR的原因！你觉得一开始就用KSR可以吗？

wangshumin12311

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" S7 O: q* _! `, X! d; v
9 v$ g7 x* J( k1 j8 S! h没有试过刚开始用KSR，你可以尝试看看，iPS不同诱导方法、细胞、模式体系都可以进行优化，祝你实验顺利！

FYH

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7 m4 z1 _$ p7 g1 G% r- @5 p! x! }) ^3 G) n- j1 @
诱导阶段,用ES级别的血清比KOSR好 ,诱导出克隆后,再用KOSR, 在诱导阶段成体细胞的生长需要血清,血清可以既补充营养也延缓细胞的衰老和凋亡,衰老和凋亡是重编程的障碍.