如果引物中间有3个碱基不配对的，还可以扩出来吗

crystal_xjw

如题，请指教。

cellman

我们在做PCR时，有时也会发生碱基错配，像你说的这种情况发生了的话就相当于碱基错配，但扩出目的片段的效率会很低。不知道你设计的引物中间怎么会有3个碱基不配对呢？在设计引物时，除了加的酶切位点和保护碱基外，其它碱基都应该和目的基因严格配对啊。

weiyepan

看你引物有多长，不匹配的地方在哪一端，如果在不匹配的在5‘端，而你匹配的位置都在3’端而且Tm值足够高的话，完全可以扩出来。PCR引入点突变就这么做的。

yangxiao1989

你P一下不就知道了么。 好奇为什么要设计3个不配对的碱基？

lxm5668

哥们，是做点突变吧？如果是点突变的话，我可以分享一下：我做过连续两个位点突变的，挺成功。
7 ^' H$ p9 S  _/ l. D' v1.注意引物的长度在30bp左右；. \) P% r3 k$ u* ~( m  s
2.突变位点在中间偏后，也就是稍靠近5‘端;
4 H& ~7 o$ t, j3.不要用高保真的酶，普通的酶就行。

crystal_xjw

回复 cellman 的帖子
: w8 \0 o- D2 [; d) C4 U: l) T. Y; U# P$ w0 r- V
做突变之用，谢谢您。

crystal_xjw

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& Q$ C8 w$ d# [8 _: n/ P7 e+ t# d" i, J! [* c) U6 s' |
受教，感谢哈。