脐带间充质干细胞鉴定问题

米儿2003

脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高，求教！

firstaider

这应该是目前公认的标准了6 n  M9 ^) G  G, b8 l
1、 细胞形态检测
# i' C6 S  n0 `0 K  倒置显微镜下直接观察，培养瓶中的贴壁细胞为成纤维样，漩涡状生长。% v4 I- B( z" a6 W
2、表面标记表型分析7 H$ c/ i2 w3 I2 ~% O
  CD29、CD44、CD73、CD90和CD105阳性，阳性率不低于95％；  j  t; _  ?) V3 O1 C
  CD34、CD45、CD31和HLA-DR阴性，阳性率不高于2％。
1 v  ^6 O1 O; E7 _9 k3、多向分化特性：在诱导培养条件下，细胞应能向脂肪、成骨分化。

firstaider

不同来源、不同发育时期的MSC，表型是有差异的，有可能是你细胞或者培养基的问题

qiang0206

回复 firstaider 的帖子4 j9 K& n! G8 C# v( @  q
2 k! \8 e2 }% a4 _1 E& d; F( a
请问兔间充质干细胞鉴定能用这个标准吗？抗体必须用抗兔的CD29等，还是可以用抗人的CD29等吗？谢谢回复！

yinfuhua

这是我制备的脐带间充质干细胞。

hcoohboy

从形态看，有点偏成纤维细胞，个人觉得，你的脐带MSC可能有点分化了。你传了多少代？用什么培养体系？

pipi168

过度分化细胞，培养基的问题

askage

请发流式图，有图才好分析。
% L* t  W9 m/ e2 U# F如果确定是1个峰，无亚峰，那么说明是比较均一的细胞群。如果其他指标均正常，仅这2个指标异常。请核查下你的样本制备过程、所用试剂有效期。制备过程尽量快，避光。洗涤最好3次，请用PBS。% A! b  v; k) p& G2 Z9 V( |
对于体外培养的MSC，阴性指标，容易出现非特异性沾染，多洗几次就掉下去了，比如CD45。阳性指标是洗不下去的，顶多降低个0.1-0.2%.

likj12

回复 firstaider 的帖子6 k; o  _  d5 e3 S* ~( Y) v

1 C8 C& |2 Q* J1 U' n& ]0 k! C您好，想问一下，您2中他提到的这些biomarker在干细胞分化后还能看到吗？
: Q/ f$ B( Q! c0 |多谢了

uslzhang

楼主的问题是“”脐带间充质干细胞流式检查，CD105不高，CD79又太高“，属于定量了，既然是定量，那就需要对检测条件进行验证，例如抗体加入量，孵育时间，孵育温度等。