ficoll淋巴分离液分析骨髓间充质干细胞

lxm5668

1."稀释液用加样枪每毫升加到ficoll液上的",你这一步改成用移液器，选一个口粗的的巴斯德管，沿着管壁慢慢加到ficoll液上，管子稍微倾斜，加完后再垂直过来，操作要慢；
4 f: u4 l5 z9 F, J1 f$ p2.最后那部离心转速要加大到1500-2000rpm,时间也延长，单核细胞毕竟较小。% U! b; P8 i9 f' k) B1 x
3.骨髓冲洗过程再仔细点。试试。

qiugt0819

回复 lxm5668 的帖子) o" R" ]6 K4 _6 O* i) ^' g
, `5 N+ d4 S3 K
好的，谢谢，下周再试一次，希望能有好结果

crazytime

感觉标本量相对有点少，所以白膜层才会不明显

wangzhiqi86

回复 qiugt0819 的帖子. o: P  F# U( |- q' _8 `+ @
: R4 B8 W+ l% u& E% l7 @
需要缓慢逐滴加入，越慢越好
1 @9 ?, M* B; ^9 C' X* E7 p( P& m3 O

fenglinzhu

一般ficoll都是500G到700G，20到30min缓升缓降，尤其是减速度越慢越好啦。加样的时候可以用电动移液器5ml移液管，第一滴一定要加好，然后就会比较好加了。分离效果的好坏与细胞密度有关，但图片上看的话红细胞应该不多，所以应该不是细胞密度的关系。从图片上来看，没有明显的灰白层，分离效果相当差，如果分离效果好的话灰白层是很明显的。在这种情况下一般吸取红白层中间的那4ml（用15ml离心管），取2ml少了点。还有就是你才50个细胞，还用PBS洗一遍那细胞肯定就很少了的，离心得再好悬液中也会有很多细胞残留的。

jxaf3900824

水平离心，离心力800G就可以了

katysong

回复 qiugt0819 的帖子) h+ N/ A$ O5 S: S9 v6 G3 T- h/ T6 b
" n$ L, e) I6 s4 o8 j9 ]: Z7 |
1. 建议稀释比例为: 小型猪骨髓：DEMEM：分离液=1：1：1* r1 h/ W" j5 @8 _
2. 你在加入稀释液的时候，先把装有淋巴细胞分离液的管子倾斜到一定的角度（45度角差不多，或者角度可以再小一点）；然后再用加样枪加入稀释液（1毫升枪的冲力比较大，可以考虑用吸管或是将1毫升的枪头用无菌的剪刀剪去一小截，可以减缓冲力），小心加入后就可以形成临界面，之后再加起来就方便很多，第一下是最重要的！
8 H, ^! d* G4 D2 B  [# j6 Q" w3. 随后再配合前面说的转数(2000rpm)、温度(25摄氏度)和时间(20 min)，相信你肯定能成功的，祝好运！

romanyuo

淋巴细胞分离液如果效果不好，可以进行全髓培养，利用贴壁培养进行筛选MSC