求助病毒浓缩问题

axh

病毒高速离心后，为什么加培养基重悬病毒 pellet要在4度过夜？
& F4 M5 P: `. F4 N  T另外，用millipore公司的膜浓缩管浓缩病毒，最后得到的病毒液颜色（酚红/血清）很浓且病毒液很稠，这样用来感染细胞会不会毒性很大？, t. C  f8 P, \( P, X7 k3 s
还想请问一下各位前辈，通常millipore公司的膜浓缩管大家是不是只用一次，还是多次重复使用，若重复使用，用什么样的条件保存浓缩管？
- w: t8 t2 X8 h" H( ~谢谢各位好心的朋友！！！

zhusealin

4度过夜再重悬，可以让病毒重悬更充分。我们用过millipore的浓缩蛋白，可以反复用，加20%酒精4度保存

telomerase

millipore的不错的，用前3000转离心，去下杂质。
( d. Z' _9 V5 _  W* y2 X- a可反复用，但一个管只能用于离一种病毒，避免交叉。我们是加入PBS，4度保存，用时倒出PBS，就可以用了。

bj123456

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- z  a! G3 w/ u$ x) |/ t9 ?: U  A
可以重复利用加入PBS4度保存就可以，但是用时要注意防止交叉使用。我们一般重复利用3次。病毒使用前要进行滴度测定，方可使用。

chentian820

其实用膜浓缩管浓缩病毒对病毒的损失还是蛮大的。为什么不试一试超速离心呢，离心后用PBS重悬分装，一次只需要几ul病毒悬液即可，可以用N次的。

axh

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8 A8 C" a! M  R8 A# T  `3 L  a3 l. X9 D) F
谢谢！你们是离心完毕后就重悬pellet，还是过夜再重悬分装？
; d. G+ \/ \9 h6 \我担心的是：超速离心后4度过夜，会否导致病毒滴度大幅降低？
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axh

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6 j$ ]& g& B/ Y. ^; N+ p! }8 ]3 O$ H3 @5 R
你说膜浓缩管浓缩病毒对病毒的损失蛮大的，是不是你们检测出流穿液还有很多病毒？

momocy

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! k8 e8 _2 U0 X" d9 p
4 L: h- Y- s0 e为什么过夜再重悬呢？我们都是离心结束直接感染细胞了，这样会不妥吗？

axh

回复 momocy 的帖子& Y( ~- z1 G: H( W. W" ?

% `% F! D( x4 V7 Y看了好多protocol，都是高速离心后，加入一定体积的DMEM覆盖病毒pellet，过夜后再重悬，说是为了让病毒颗粒充分溶解，不知道这样做跟离心完毕后马上重悬分装冻存相比，哪个更好，所以才来求助。

zhusealin

4度过夜不会影响病毒滴度的，冻融对滴度影响较大