求教：请问有人养过山羊脂肪干细胞吗？？

小小的晓晓

  在实验室做了一个月细胞还没有养出来，真是相当的郁闷。现把我的试验步骤列出来，望各位老师指点迷津
+ i' [0 O4 [+ I1.收集山羊的脂肪，一般在3g左右，迅速拿回实验室。
$ N, s9 \  r6 V7 W4 v2.在超净台中用加双抗的PBS反复清洗脂肪. 这一步只能用37℃的PBS，不然脂肪会迅速变硬无法进行下面的操作。
; Q* t/ T& b+ R# E" B( v3.剪碎。用眼科剪剪碎脂肪，剪成乳糜状。
" Z1 v8 ^* M& t6 |3 H" j( Q2 N4.消化。加入等体积2％一型胶原酶，37度恒温摇床消化1个小时左右，发现无论消化多久山羊脂肪都无法像小鼠脂肪一样形成粘稠状，并且油脂贴管壁很严重。5 |6 q: W. }. N2 T
5.吹打，。山羊脂肪几乎就不能吹打开，脂肪总是附着在枪头上。
8 d* s+ z- f4 X9 K) F6 {! T6.终止消化过筛，过的是80目还有200目的筛。: l+ Z0 Z- Y. Q& [
7.离心，2000转，8分钟。1 c8 N5 u, ]3 j  y6 L
8，加含15%胎牛血清的DMEM，吹打，制成细胞悬液。
4 a! `2 ?' K$ q# D" o9.接种。将细胞悬液接种于培养皿。
* C! \/ n6 {' a! F% f这个实验做了很多次，但是每次离心后感觉都没有细胞。第二天去观察也没有贴壁细胞。不知道问题在哪里，望各位老师指点。