MEF饲养层培养干细胞的传代

mayiwaiwai

请问各位同学，在饲养层下的干细胞，如何传代呢，消化的时候MEF一起消化下来，网上看见有人说是根据MEF和ES不同的贴壁能力把他们放在明胶处理过的皿中1h，然后再轻轻吹打培养表面，将上清转到新的铺有MEF的皿继续培养，还有人说是也可以将消化的混合物接在么有明胶铺底的培养皿中，路过的同学给出自己的传代步骤呗，不甚感激！！！

echowdk

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9 x4 ^& O; |8 i) T养的是mES么？7 P, c$ Z' I2 [7 C0 B' X+ l
看你传代以后的细胞有什么用途了。如果就是一般的传代扩增的话，有无feeder对ES细胞的状态什么的没什么影响。如果是为了进行进一步实验，排除feeder的影响而去feeder的话，要求去feeder。
" F$ ~- h$ i7 n我两种方法都试过，都是可以的。

mayiwaiwai

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是R1 小鼠干细胞，就是基本的传代，因为只有一株，想扩增一下。这样MEF会不会越来越厚呢，在饲养层上一般可以传几代呢？

李夏

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如果是小鼠胚胎干细胞，只是为了传代，MEF不用去除理论上可以在feeder上无限传代。因为MEF作为feeder是先经过丝裂霉素处理过的，这种情况下再经消化基本上都活不了了，所以大可不必担心MEF的问题

mayiwaiwai

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(⊙o⊙)，吼吼，说的也是，那我要拿来冻存的干细胞，是不是也不需要将饲养层细胞去除干净呢？还有就是，冻存的细胞我后来想做无饲养层的培养，么有去除干净的MEF有影响吗？

echowdk

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& b. {1 I5 w- [; n4 \) k不会的。7 P8 o3 F% Y6 |
首先，干细胞理论上是按照1:10的比例向下传代，当然这可以视ES细胞的品系做相应的调整。假设我们按1:10的比例传代，一个孔里的feeder传到10个孔里，亲想一想这些feeder是不是可以忽略不计了呢。另外，feeder细胞也没有那么强的生命力，一般feeder铺个四五天还能活算比较好的了，传代以后feeder也是会有一定的死亡的。放心传吧。

李夏

回复 mayiwaiwai 的帖子# w! }# s* i( i8 l! Q2 Z3 p3 B( Q5 O5 g4 K
3 e! m7 K$ L1 T! v% Q6 z
我就是这样冻存的，没有去除MEF，没发现有什么影响。理论上多余的MEF都是死的了，经过一次换液就几乎没有多少了，应该不用担心这个问题