脂肪干细胞养不出来

meister

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" f3 W+ U* E/ t不需要水浴振荡器， 需要空气浴摇床。 37度，必须的， 手晃不成。

stemcellmeng

这是比较标准的Protocol了，如果改进的话，应该是在消化完离心之后，过70um的筛网去除大块的细胞。理论上应该是有细胞的，可能是你取的组织太少了，下次可以尝试多取一些组织，而且一帮组织多的话，酶量也需要相应增加，一帮一只c57的小鼠取的脂肪，可以用5ml的胶原酶来进行消化。不知道你的培液是不是按照标准的MSC培养液来配置的，而且别忘了加双抗，防止污染。

都市青蛙

loveless 发表于 2012-10-3 14:27
3 K+ j$ a8 }& \+ c9 c1 H+ h0 C回复 都市青蛙 的帖子& F& N( p' l4 a2 j
9 K5 T* d8 \- d, \. {
我用的是4~6周的小鼠，一只小鼠取到的脂肪很少，不到1ml。0.1%不合适？请问你是用多 ...

5 {, x% v$ E, b9 T我取的也是1ml左右，要重点关心你的胶原酶作用浓度，这跟配比浓度有区别

chengge21

用胶原酶I放在摇床上，37°C消化，消化时间延长到一个小时。消化完后，要用吸管反复吹打几次（很关键），然后离心去除脂肪上清，加入完全培养基悬浮细胞，用200目滤网过滤。过滤完后离心，然后去掉上清，用培养基悬浮细胞，培养就行了。

tangyihan

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8 J. P# j5 K) ?5 n/ _4 z, [
: V, s9 A+ e* D6 a/ @2 S个人觉得胶原酶浓度也不是太重要，虽然文献上基本都用0.075%或者0.01%的胶原酶消化，但我每次消化时用0.2%的胶原酶也很好，2g大鼠脂肪组织可以取到10的5次方的细胞，觉得胶原酶溶液体积应该在脂肪组织体积的3至4倍的样子，充分与脂肪组织混匀才能消化彻底吧，如有不足之处还望各位指出...

loveless

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1 T% o' I* w+ r' q0 U
7 ~% i3 `! O1 T   我用的是Balb/c小鼠，胶原酶加1ml，因为脂肪量只有0.2ml。我的培养基是买的Hyclone的高糖培养基。

loveless

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- z) N8 E% f8 i% B' q
1 S7 T' V7 j9 Y胶原酶我也用过0.25%，但是还是没养出来。我用0.1%的养了人的脂肪干，方法步骤跟养小鼠的是一样的，就是脂肪量用了10ml，能养出来。可不知道为什么养小鼠的就是养不出来。

xiaoyurly

可以选择胖点的小鼠，周龄大一些对ADMSC活力影响不大，另延长消化时间到1h，原代铺盘时细胞密度一定要大，2d后即可换全液，一般3-4d可传代

loveless

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' Q( a) P; z( f! S) X- C5 P; i
/ {" r: S0 |* _周龄大小对ADSC没影响么？我用4~6周的balb/c很难养出来细胞，换成2天大小的SD乳鼠用同样的方法能养出来了，第2天就有好多贴壁的了。难道是balb/c小鼠脂肪干细胞少？
* r  z8 v0 M: J1 K) n  Q

cartoonyang

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5 U* d8 ?! L+ Q8 T" B5 ?1ml的量也太少了。消化时间延长到1小时，然后用枪头来回抽吸，再用100目筛过滤，再离心，再用培养液离心洗一遍即可。可以考虑48小时再换液。或者尝试用组织块培养法。