DC培养中出现的问题

莫邪小仙

分离后首先贴壁2h  用含1%血清的DMEM 有时候贴壁数量很多有时候很少，而且会有死细胞和细胞碎片。贴壁数量多的时候隔天观察就会出现死细胞和细胞碎片，做了好多次都是这样子，都要郁闷死了。不知道大家做的都怎么样，有没有遇见过类似的情况或者大家都是怎么养的才会有好的结果？请大家不吝赐教

莫邪小仙

难道就没有遇到类似问题的亲吗？

wagumaxida

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) Y; ^0 Q7 Y9 c& `8 V1 c2 b你试试贴壁的时候别加血请

莫邪小仙

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* y# y* ^: U  y0 `3 u. s, U5 B8 Z3 {
请教一下，血清里不是有促贴壁因子吗？一直想不明白为什么促进贴壁要不加血清或者加低浓度的血清呢？

452359357

建议贴壁后3-3.5h后再加培养液

cheeray

生理盐水清洗三遍之后就没有多少碎片和死细胞了 吧。 是不是你的单核细胞来源不好？ 我们都是贴壁半小时就很多细胞贴壁了。。

莫邪小仙

回复 cheeray 的帖子: w& J3 p6 F. I1 w, Y7 g
1 M/ M; u1 v% F+ s( Z
贴壁的时候状态是好的，贴壁后就发现有时候贴的多 有时候贴的少。而且隔天就发现有碎片和死细胞。。。请问你们在分离单核细胞的时候裂解红细胞了吗？

wjp130

回复 莫邪小仙 的帖子1 |% V+ i$ w# A4 O( t/ p1 {1 V$ t

1 Z5 z+ G3 v( C1 I# Y9 U5 v" I细胞分离的时候不要加裂解液，直接贴壁分离，贴壁俩小时足够了，DMEM里面不加血浆，理论和实践是有区别的，2小时后，弃去上清，用生理盐水洗三遍，洗的时候轻轻晃动，洗完加培养基，DC还是很好养的，
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cheeray

贴壁时不加血清， 细胞清洗三次 ， 梯度离心。。我半小时就贴的很多了。。