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大家来讨论一下如何计算HSC的数目 [复制链接]

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包包
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楼主
发表于 2012-11-18 23:04 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我最近在做一些动员剂如G-CSF处理后检测小鼠PB里HSC的实验,目的是观察动员前后PB里HSC的改变,结果发现通过FACS检测Lin-sca-1+c-kit+(LSK)细胞,并没有显著的率的改变,但动员后PB内有核细胞数明显增多,相应的LSK细胞数也增多。查阅了一些文献,多是将其换算成每mLPB里包含有多少HSC数目,具体怎么换算,准确率如何,请教大家了!
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沙发
发表于 2012-11-19 09:27 |只看该作者
你取了多少ml PB,这里面经过流式分析其中有多少HSC数量,除以体积不就是结果了么?
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藤椅
发表于 2012-11-19 10:06 |只看该作者
动员到PB的HSC可能不会那么多,所以FACS上体现不出来你的效果,或是说没有统计学上的意义。你可以培养一下HSC,看与对照组有无统计差异。
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优秀会员 金话筒

板凳
发表于 2012-11-19 23:44 |只看该作者
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这样计算可能接近真实:定量(体积)取抗凝血样,收集细胞进行染色,确保处理过程没有细胞丢失(近似),制好的FACS样品体积准确定量,然后取一滴细胞悬液在血细胞计数板上计数有核细胞数,可算出流式样品中的有核细胞总数。其余样品用FACS分析确定LSK在有核细胞中的比例,可算出流式样品中的LSK细胞数目,最后换算到取的血样的体积里
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报纸
发表于 2012-11-20 14:13 |只看该作者
楼上说的有道理。我这两天看了看资料,应该可以这样计算:取血后通过血细胞计数仪计出外周血WBC数/mL,同时取100ul血样处理标记抗体,FACS检测,确定LSK在有核细胞中的比例,随后将这个比例带入到血样WBC数/mL里,得到HSC数目/mL PB。这个指标应该可以相对客观的衡量HSC的变化。
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