问个抽质粒的问题，Cartidge可以用布氏漏斗+滤纸代替吗？

小刺猬2932056

我觉得你可以尝试一下，但我之前用那个做个一次，当时不知道什么原因过柱子后竟然滤液不清透，还有少许的絮状的东西，那滤膜很厚的，然后我把滤液又用新的过了一次，把老板给心疼的啊

weiyepan

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国产的大抽不是说原理上做得比国外差，现在抽质粒的方法都很成熟了。但是，国内的原料质量不稳定是肯定的，至于质控有没有做好，那是看一个个公司的良心了。8 O0 K. J; g  Q0 K6 l7 L, \' W, x( d
另外，QIAGEN和MN的大抽都有用的离子交换。现在离子交换方法的kit不多，成本高，国内销量不好所以没人做。国内用的都是硅羟基方法的，这种方法很难去除内毒素。至于说转染有没有问题，一个是看最终抽出来的浓度，另一个是看细胞好不好转。如果说都转的293T，那我看PEG沉淀也能做。

sunnh11

完全可以用漏斗和3M滤纸代替，以前没有Cartidge时，我们常常用过滤代替离心，没发现什么问题。

zhangtcm

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我那时候，大概是07年吧，用的是质粒抽提试剂盒，北京天为生物公司；其中一个是GFP的，转染P19细胞，还是可以的。' N# f; g* ~7 F) P1 j" |, v

2012-12-4 15:14 上传

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zhangtcm

回复 mhqh 的帖子7 p" y! H  f4 \) W" H

% g  t3 |: H# P- m* z: n我那时候，大概是07年吧，用的是质粒抽提试剂盒，北京天为生物公司；其中一个是GFP的，转染P19细胞，还是可以的。
4 N$ s) b( w- ~5 `

2012-12-4 15:18 上传

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mhqh

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/ H. m& b& z. L# S
. r* R8 H5 Q. \& b6 e9 S1 V谢谢！ 1 s8 c2 t1 [$ G' ?  h

3 n: L5 j" z: z3 W" z( m& q/ l4 l我有个问题，你是用抽滤还是常压过滤？就是我用布氏漏斗抽滤，就是底下用水泵抽，然后很快就漏下去，但是，抽了之后，蛋白质就把滤纸的孔堵住了，用那个FWB2的时候，就再也抽不下去了... 怎么办？

ouyi2738

我们用的也是MN（macherey-nagel）的maxi，比qiagen的好用，不用抽滤，我在过滤纸前都简单离心一下，撇去上层的白色裂解物，滤的速度更快。

祁门红茶

4 i/ I. i6 D" C; S' ?" u3 J
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回复 mhqh 的帖子8 H. ^  u' |9 X( i& r

1 x$ r3 m* s  ^0 `- j- G应该不可以，这个材料应该是带正电荷的，不是起到简单的过滤作用，是可以吸附质粒的。

mhqh

回复 祁门红茶 的帖子  K4 |% G; L9 V3 r0 [
. o- ^) {+ t3 i& e
额。。。 质粒在下面的滤液里好不好。。。 吸附了不就杯具了。。。

mhqh

回复 ouyi2738 的帖子$ E( f. m6 _4 H. p/ f

( i7 s7 Y+ Y( b: o谢谢！！