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markllq

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楼主

发表于 2012-12-13 19:25 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教各位：大家有没有发现在做qPCR时，actin在ES和MEF当中是不齐的，大概ES的CT值要比MEF大2个cycle。我开始以为是偶然现象，但是现在加起来做过几十次了，每次都是这样。是不是因为actin的绝对表达量在ES当中确实比MEF要低？如果actin的表达量不一致的话，用它作内参还行得通吗？有没有比它更好的内参？谢谢！

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沙发

发表于 2012-12-14 09:45 |只看该作者

GAPDH 和RPL19都是可以的

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markllq

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藤椅

发表于 2012-12-14 10:27 |只看该作者

回复 chentian820 的帖子 D* v' q* u5 F4 o
* x% o5 z+ r) c
谢谢！能否再详细一点，这两个内参在MEF和ES当中的表达量如何？

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wuzhoulingxiao

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发表于 2012-12-14 12:50 |只看该作者

GAPDH或ACT B，都可以，这两种作为内参，因为即便是不同的细胞其中这两种基因的表达量都是相同的。

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lazyworm

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发表于 2012-12-14 13:15 |只看该作者

CT值不同会不会是模板的量不同造成的啊

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chentian820

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发表于 2012-12-14 13:57 |只看该作者

回复 markllq 的帖子' e6 ]8 r! \8 M9 D
" M: A: }; X- ~ p& a
这么跟你说吧管家基因在不同的细胞的表达只能说是相对恒定的。你要比较不同细胞中的actin表达情况，建议做一下northern或者绝对定量PCR，这样你就能看出单位质量的总RNA中有多少actin。