请关于PC12细胞的一些问题

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有人用PC12细胞做过实验吗？有些问题请教达人，/ j* m: s# Q8 ^. E
1、一般是用分化的还是未分化的细胞做实验呢？# T5 }5 m. C( d
2.是不是如果想研究神经元功能的话就要将之诱导为高分化型细胞。
2 c& w  Y" p* @3 o: a, H3.听说PC12传代次数多了也会分化，还会疯长，那这种分化和NGF诱导的分化结构功能有什么区别呢？" Y" T, A. n) D+ x
4.NGF诱导的高分化PC12增殖能力怎么样，可以进行RNA干扰等实验吗？% Y9 |4 L% [7 i* _/ ]3 V

; A$ t* e; {1 F8 O: Z( o0 z谢谢啦 ^^

86964109

看了一些讨论，有点明白了" n8 [  ?7 C  r' I2 h3 f
1.用分化的还是未分化的细胞做实验要看实验要求，好像做药物筛选用未分化的，因为分化后的细胞对药物更敏感。
- _4 T4 f# a5 o$ {2.但又有疑问了，如果我做神经元相关的实验是不是一定要做分化的呢，还是没有答案
3 ~+ X+ R9 @5 u& w( B/ F2 L; A0 X7 i3.国内的PC12有未分化、低分化和高分化之分，但是ATCC貌似只有未分化细胞，国外文章中做PC12分化一般用NGF诱导，Greene LA , Tischler AS . Establishment of a noradrenergic clonal line of rat adrenal pheochromocytoma cells which respond to nerve growth factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 73: 2424-2428, 1976. PubMed: 1065897  文章里讲NGF诱导时的PC12没有增殖能力，但会一直分化，停止诱导后分化停止，增殖开始继续。这与国内的高分化PC12细胞株有增殖能力且不弱的说法不一致，而且国内高分化PC12的来源似乎有点不明确，细胞形态也与NGF诱导的细胞不一样。7 K+ d1 l- |& f6 A$ B9 j+ T& z8 [

3 p3 t; k$ d( A4 C# }8 H1 \- y所以又有了新的疑问
$ O, z5 @3 R, i% ?/ }- ra 用国内的高分化PC12细胞株做实验能被杂志认可吗？4 x3 ]$ Z# y$ [
b如果不用高分化细胞，因为要做转染，是否必需保证细胞增殖能力呢？如果一定要用有增殖能力且NGF诱导分化神经元的PC12细胞做的话，可以这样设计么：先加NGF诱导至突触形成，停止诱导，恢复增殖，再开始转染？

chentian820

我以前一直做PC12，建议如下：
1 l7 ~0 S+ j% w/ |: M+ g. F# |9 z1 国家还是那个通用的只有未分化的PC12，加了NGF后增殖逐渐减弱，长出明显突起，最后几乎停止增殖。5 L$ N$ A6 y( d' D4 G
2 国内的低分化和高分化PC12细胞是中科院细胞库的。事实上连他们自己都搞不清楚他们这两株细胞是怎么个情况。我以前还电话咨询过，他们就简单滴说:不知道. 令我非常气愤。! v4 F( T: Y) y1 n
3 我以前也查过是否有用中科院的高分化细胞株发表的SCI文章，截止去年，就只有一篇，而且影响因子很低，可信度就打折扣了。
5 n# \4 }. l+ p- D. V+ _1 C( I4 k4 如果你要买PC12细胞株，建议你到武汉的CCTCC去买，他们的细胞株很不错，以前我一直用他们的。! q0 [8 r; I  }" }  H$ o
5 PC12做神经元实验可以用分化的和未分化的。特别是如果你要观察神经突起什么的，就要用分化的。
5 u( Q3 A4 V0 c6 有几个建议你可以参考：1 你为什么不先转染PC12，在做分化，或者筛选出稳转株后再做？2 如果你确实要做神经方面的实验，可以考虑用元代细胞或者神经干细胞。3 SHSY5Y和N2a都比PC12好养，而且也可以诱导分化（诱导因子都比NGF便宜），你可以使用这两株。# f# l. ]$ F6 w/ \" Z

86964109

9 x+ c" x0 e8 P" r0 W0 b( J0 R9 q, r3 B9 ]" G, h5 }$ ]8 h( p
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# ?1 x) q1 @; [; ]# O, N
+ ~6 n. W: x7 ~& ^6 h实在太感谢您的指点啦，是这样的，我想研究氧糖剥夺以及信号通路对于神经元细胞增殖和凋亡的影响，所以就想是不是要在诱导成熟的神经元细胞中进行实验，其实后续实验也没怎么想观察神经突触变化。另外考虑原代神经元细胞和神经干细胞不太好分离培养，就想找个成熟点的细胞系了，看过一篇文献是先慢病毒转染2d再NGF诱导3d的，做的挺漂亮的，不过我想做普通的瞬转，考虑到NGF诱导需要较长时间，担心瞬转会没有效果，又有点局限在一定要在得到神经元细胞基础上做实验，就这么设计了。。。

lhmxm

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7 R# \3 T$ g8 S. m+ ^/ U
, J, w7 R( G4 h2 t文章题目是什么，可以提供一下吗？

86964109

* a" @, o, A  K& o- A
( h. N# d) i" q, F. d( O" h' ^" k回复 lhmxm 的帖子8 H. r: @- w' V0 }
; p! l- V) ^! ]& A" j  B" P

碧落

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4 D: X$ [6 A- D& I6 [
9 z. a8 n; M6 \' [* g; SCT!!!!哈哈~

碧落

前段时间用了一阵子PC12，糊里糊涂的用着，后来才知道PC12是可以分化的。后来比对了下，发现我们实验室的应该是分化后的，都是有突起的，细长型的。

86964109

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8 T% o. t8 ~5 R! j7 S, C/ W1 ]" c7 g$ X- R6 ]) L- d
你的分化细胞是培养过程中自己慢慢分化的吗，还是加过NGF的，我看到直接培养的分化型PC12好像是菱形的，没有突起

碧落

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! S& I0 |( s) J- t# X! A! [8 \* @
额，其实我们的就是普通的培养基HG-DMEM+10%FBS。不用加NGF，可以传代，生长速度也可以的。形态嘛，说菱形也可以，就是有突起的，不是未分化的那种圆球形的。