细胞复苏的疑问

huangcong1988

现在细胞越来越娇贵了，以前细胞冻存用40%FBS,10%DMSO,50%DMEM就能配冻存液，而且复苏很容易存活，复苏用10%血清基本上复苏能存活75%以上，而且两天内就能长满传代，以前冻存细胞没有冻存盒，都是用棉花包着，然后直接扔到﹣80。现在冻存液为90%FBS，10%DMSO，复苏时候用15%血清（有时候用含双抗的），复苏长了很久都没长起来，而且细胞老漂，细胞复苏的话，基本只能存活10%，另外最主要的是现在都用冻存盒冻存细胞，到底咋回事啊？

yuhaoze

支原体，看看有没有支原体感染。再就是，我以前用90fbs+10DMSo的配方，复苏率很低，现在不用那么高的血清了，都加一点DF12.

MEMO2012

原来血清浓度太高也不好

huangcong1988

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- g  C0 U/ s/ b4 F
5 m4 X$ ]) y) O" f& J' F6 W9 G3 g行，那我试试降低血清浓度，按理是血清浓度越高越好吧？

huangcong1988

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! z9 k# T. t7 T% b4 l! h/ c4 Y加多少D/F12?

yuhaoze

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9 X6 w6 r5 d3 T! U' m0 b1 m& h" y8 W+ f# Z+ |
我现在用40%

xu_shufen

细胞冻存效果好坏取决冻存细胞的状态、DMSO毒性，细胞冻存时最好处在对数生长期，DMSO是一种渗透性保护剂，分子量小，渗透快，在温度高时对细胞毒性大，调整冻存的方法。

wang3033

用20%FFBS,10%DMSO，70%高糖DMEM试一试，应该没有问题的

雪国叶子

我认为和冻存液的成分关系不大，主要是你冻的第二批的细胞细胞状态可能不好

雪国叶子

我认为和冻存液的成分关系不大，主要是你冻的第二批的细胞细胞状态可能不好