大家收RNA样品时都是怎么裂EB球的

不倒翁

最近在收一些EB分化的RNA样品，发现到后面的天数，d6，d8，d10的时候，随着EB球的长大，裂RNA越来越难了，有时候加入Trizol后几个小时还是可以看见细胞团在里面。加上之后我也会吹一吹，然后裂的过程中晃一晃，还是不行。请问大家都是怎么操作的？望有经验的人士不吝赐教，多谢！

yueweilei

貌似可以贴壁处理后再提。

yueweilei

貌似可以贴壁处理后再提。

haijing12585

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& V, r5 i7 t" B) q
' l- w" Y' b2 ?5 U6 o- l8 e震荡一下不可以吗？

chentian820

在加trizol之前一定要PBS洗，出去培养基里面的蛋白。然后就是trizol多一点，加了之后用振荡器震荡。效果不错的。

不倒翁

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* Q: j3 V1 C6 O9 l0 t1 u, o# v2 |# J; I
你那个不是正常的EB吧 铁壁处理的话需要多少时间呢

不倒翁

回复 yueweilei 的帖子; K2 e* e: t7 u- m3 b/ b
/ G( F* k9 ?6 e
你那个不是正常的EB吧 铁壁处理的话需要多少时间呢

不倒翁

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" t1 u0 Z% X9 [- X; p7 e8 Y" {8 h1 v4 M8 W( K
多谢多谢 我以前都没有洗 EB球小的时候没有问题 大了就不行了 震荡会不会剧烈了点？ 提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长 要不然会有基因组DNA污染呢

不倒翁

回复 haijing12585 的帖子1 O6 o* {  P( H! B1 w6 r* I
' d$ b# v, c1 T8 \! Z
不知道会不会剧烈了点？ 提RNA的时候貌似剧烈震荡的时间都不能太长 要不然会有基因组DNA污染呢  我一般都是拿枪吹一会，放置的时候有时候拿起来晃一晃，但是后面的天数效果还是不好

yueweilei

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: r$ y* B; M; I2 {+ J/ Vd8-d9时的EB，换个容易贴壁的皿，第二天就能看到贴好了。不过不知道你的情况适不适用！