包病毒细胞总是污染，怎么办？

yueweilei

最近，包病毒的时候，总是在转染完，换液24h，发现细胞被细菌污染了。不知道怎么回事啊？同时做的别的转染实验的细胞都没问题！是不是包病毒的质粒都得去内毒素啊？求指教！

zhangtcm

回复 yueweilei 的帖子% `0 A" ?; G9 y& D& I

, }- R3 ~( l$ r' @内毒素不会导致细胞污染的

yuhaoze

质粒污染的机会还是比较少的，不过也不能完全排除，如果别的转染实验没问题，只是限于包装实验的话，问题很可能出现在包装质粒上，但是这种可能性比较小。重新好好提取一次质粒，保证没有混入细菌。
% }$ ^2 f2 m5 l5 }7 i8 o2 R好好操作没有问题的，我包装病毒还没有污染过

daviddow

可能是质粒污染了吧

zhangtcm

回复 yueweilei 的帖子" ?9 R1 U6 q& D" u

- Y, A0 d5 x( g4 K% M& n1 A3 s- u质粒污染的可能性较大，重摇一下，再提一下吧

wangcs

为了稳妥起见，可以大量提无内毒素质粒，然后用0.22的滤器过滤一下，转染应该没问题了！

yylhxylong

你用的media里面加了P/S了么，没加的话，貌似的确比较容易污染，另外操作要小心啊~
; ?* T1 P& i6 d! D质粒尽量用无内毒素的kit来提吧，尽量少加东西，加的越少污染的概率越小~

chentian820

其实不用再摇菌后大抽，你只需要用3倍体积的无水乙醇沉淀过夜处理即可，什么细菌真菌什么的全部干掉。

ying

质粒可以抽好之后56度加热15分钟，可以杀掉大部分菌。转染时加上双抗，一般不会死什么细胞的。包病毒的293T很皮实。

yuhaoze

转染时候不要加抗生素，会影响效率。包装病毒的时候更不要加