肿瘤干细胞悬浮培养方法

qq348940434

我把普通的肿瘤细胞弄来悬浮培养，培养了一周了，没看见成球的干细胞，结果是细胞全部贴壁成膜了。我用了两种方法来培养的，一种是直接把一瓶快长满的细胞直接加干细胞培养基，另一种是把一瓶细胞一传二，然后加干细胞培养基。结果这两种方法都出现细胞贴壁成膜的情况。
, A# G5 n! Q/ S" h# e& u以上情况到底是怎么回事，请哪位师兄哪位老师帮忙解决一下，不胜感激。

jiguojie87

你养的什么肿瘤干细胞
0 I, H: K) ^$ P* D% ~# m) `1 h

sycdegcb

你可以试试在培养皿底铺一层琼脂，或者是用悬浮培养板培养。培养液中血清和贴壁培养皿都会促进细胞贴壁

leisong12

要用低粘附培养板，另外无血清培养基里是没有血清的，只有一些生长因子和牛血清白蛋白等

qq348940434

回复 jiguojie87 的帖子9 ^8 m& U  z$ I

3 I3 a* L2 h3 A) @0 K% R我养的是甲状腺髓样癌细胞。。。

qq348940434

今天订了一箱corning的6孔板，不知道能不能养出来。. ]+ P, _7 o- E# m5 Q
    现在最纠结的就是不管是用的培养瓶或者培养皿都贴壁成膜了，大概有10+瓶都这样。
# c8 B! |: R# Z' N* [; |( t浪费了好多培养基和细胞因子

mike19840320

养干细胞得把时间靠上啊，为了不让其贴壁，我当时基本每隔2-3小时就吹打或摇晃细胞一次尤其第一天，细胞最容易贴壁，熬过第一天，第二天以后就会好点了。不过你这细胞密度好像太高，细胞容易聚集成球，而不是干细胞自我更新形成的克隆球。

qq348940434

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那请问6孔板的话 每孔大概多少细胞。
0 ^$ |( C$ w- e. ?! ~" V  然后摇细胞的问题，我中午11点左右传到6孔板的，下午5点左右的时候去看，又有好多细胞贴壁了，真是心伤啊。

qq348940434

回复 mike19840320 的帖子0 u) u2 A' d  T+ [+ v
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还有个问题就是前面几天的换液，是半量换液，还是全部都换掉。

qq348940434

唉，又傻了一下，订的6孔板货号给公司发错了，这里温馨提醒一下，要使用超低吸附6孔板的朋友，请认准corning的货号是3471的。我错订成了3516.真是坑啊