干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

 

 

搜索
干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 干细胞之家论坛 干细胞实验室技术交流 实验室综合讨论区 经验教训:belta巯基乙醇失效导致western半年内的结果失 ...
朗日生物希瑞干细胞
查看: 127385|回复: 4
go

[原创] 经验教训:belta巯基乙醇失效导致western半年内的结果失败

Rank: 3Rank: 3

积分
628 
威望
628  
包包
2771  

金话筒 优秀会员

发表于 2013-2-13 04:29 |显示全部帖子
之前我们医院实验室里western始终出不了结果,蛋白带非常乱,背景一片混乱,做细胞时还好一点,跑组织榈根本是乱七八糟,当时找原因,几乎把western的每一步都进行了排查,可结果一直不理想4 U& D; d2 f) q! Q9 B% k  j
" }( H4 Q3 O1 x
后来,无意中我用相同的样本,在别家医院实验室做,结果很好,于是,就怀疑到了loading buffer中的belta 巯基乙醇上面,原来,我这个实验室的一个博后,半年前一次性的配了一大瓶的loading buffer,其中加了belta巯基乙醇,一般来说,loading buffer都是室温保存的,所以他们也没有放入到冰箱里,但其实,belta 巯基乙醇有很大挥发性,应当现用现配,就算是室温保存,也不应当超过30天,超过30天后应当再补充,这位博后配了这一大瓶loading buffer之后立即就加了belta 巯基乙醇,但很长时间没人用,当实验室里人开始做western blotting的时候,又没有及时补充belta 巯基乙醇,也没有加DTT等其它还原剂,而且loading buffer每次用量很少,这一大瓶所有人都在用,但没人想到此时的belta 巯基乙醇已经挥发的差不多了,所以几乎没人能跑出很好的带来
1 X3 G6 k0 B) s$ N+ L+ b% S  [; a8 a; T: v; w& x: f" }
我重新配了新的loading buffer之后,大家这一段时间以来结果都不错,经过这件事情,深刻感受到了实验真是差一点都不行啊,一个小环节出现问题,就可能导致整个实验失败
; [; Q, m- W, \' \" l: u
! A. y( o3 u# M1 j7 T( |0 e1 a5 E! f: x我现在加了belta 巯基乙醇的loading buffer,都保存到-20,这样保存时间应当会延长很久了
+ _( B' l: v2 v$ y4 k8 V6 i- l7 y) _: d/ e5 U
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 30 + 50 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 30  包包 + 50   查看全部评分

Rank: 4

积分
1907 
威望
1907  
包包
6139  

专家 金话筒 优秀会员

发表于 2013-2-14 01:02 |显示全部帖子
回复 临床干细胞 的帖子
9 j$ ?% G  z( K7 X1 A* G: P8 g# E5 x' E. B
其实只要密封得好,放室温也没问题的。我自己配的就是配好5xloading buffer w/o reducing reagent。一次拿1mL出来加还原剂,用个3个月没啥问题。放低温SDS会释出,每次都要加温很麻烦,感觉反而会加速还原剂的降解。% f8 g& Q* N1 G$ G
另外beta-ME这东西见光分解,要放暗格是真的。
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 10 + 20 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10  包包 + 20   查看全部评分

Rank: 3Rank: 3

积分
469 
威望
469  
包包
864  

金话筒 优秀会员

发表于 2013-2-18 08:19 |显示全部帖子
希瑞干细胞
回复 临床干细胞 的帖子
0 i  ~8 d4 @8 R) v: V9 V" p4 L$ T" W' W! K8 `) T; I: N5 Q
我们实验室都是配好后分装,放在-20的
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 2 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
128 
威望
128  
包包
351  
发表于 2013-2-18 13:04 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
嗯 还是配制好进行分装,-20保存为好,用时提前室温融解
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 3 + 10 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3  包包 + 10   查看全部评分

Rank: 2

积分
53 
威望
53  
包包
289  
发表于 2013-11-17 16:23 |显示全部帖子
回复 newjack920 的帖子
6 ?; s5 F# n( v- J  Q  m! p8 Q& Q8 q; S1 p. p: b3 P7 e4 ^* F# ?, O
不用煮一下吗?觉得直接加的话还是有点粘稠!
已有 1 人评分威望 包包 收起 理由
细胞海洋 + 1 + 5 欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1  包包 + 5   查看全部评分

你需要登录后才可以回帖 登录 | 注册
验证问答 换一个

Archiver|干细胞之家 ( 吉ICP备13001605号 )

GMT+8, 2019-1-22 03:15

Powered by Discuz! X1.5

© 2001-2010 Comsenz Inc.