大鼠脂肪干细胞长期培养自发恶变

gh2010

回复 chichao0000 的帖子9 w; {, D, {3 N  T
$ j3 m* v5 V- S2 J
正常组织，正常受体小鼠

hluoli

bin8 p% X3 B1 O0 M" H
你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。

hluoli

bin
. ?5 o- C5 {+ h你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。4 O/ {+ |" X; Y5 i$ i$ K
请问这是指原代还是传代细胞培养？
' D5 A; P& C8 |) ~此外，bFGF的浓度和量各为多少？
: R+ U; j+ H9 z) w7 g# \谢谢！

hluoli

回复 bin 的帖子7 L1 E4 d7 ], Z$ l6 N; Y1 y, ?2 h

9 L. Y% W) I: X5 X
& X( w0 R  w- V! g" `3 `0 x/ ?* @' jbin. r/ H1 {. k( t7 G4 X) V
你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。% m% x% C4 Y7 y5 ?
请问这是指原代还是传代细胞培养？
6 k( B# _4 h0 ?9 E9 U# c* D此外，bFGF的浓度和量各为多少？/ n* f$ Y; g0 M' \! J, ]
谢谢！

bin

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0 s: @* o; X7 C' T原代培养和传代培养都使用了，至于bFGF的浓度属于公司机密信息，我在这里不方便透露，你可以做一个浓度梯度，达到自己满意的生长速度的最低浓度及可以，还有其他的细胞因子也可以尝试一下，祝你实验顺利。

hluoli

回复 bin 的帖子) s* ~+ j# G- N5 e

' @1 P% D0 o8 P6 \* n谢谢你的建议。
9 B6 O9 E3 L0 Z; w第一次养脂肪干细胞居然就出养出来了，而且传代长势很好，二天就长满了，想问问，一般脂肪干细胞极限可以传几代？
" A, d7 P+ R6 l! H7 `0 e还有一个问题，我的细胞中有很多的小黑点，这里有个前提，细胞长势不错，我考虑是代谢物，老板觉得小黑点太多了，向污染，我同事认为有可能受支原体衣原体感染，我传一张原代的第7天，请大家帮忙看看小黑点是什么？

hluoli

晕，发不了图

细胞海洋

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单个图片不要大于1000kb 可以截图

bin

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2 w1 K1 a5 X2 Z* f- E
) ]: U8 j) {* y% |& @一般来说脂肪干细胞可以传很多代的，以前我们实验室的经验是3代以上才算比较纯的了。这个要看你的需求是什么了，根据自己的需求，再根据文献来确定，我的建议是不要传太多，我记得以前有一篇文献报道BMSC传5代以上就会具有致瘤性。如果觉得细胞被污染了，尤其是支原体污染，我建议你把整套设备和试剂都换了，支原体主要来自血清，购买进口血清，养细胞不要用国产的。

daiying5200000

7 U: \* q: E7 A5 [! M# H
# M0 O& }' b- V" f/ A2 f0 O2 b
我之前也有类似的情况，出现在成骨实验中，细胞密度高，培养时间长是那样了。7 p3 N3 }0 l) G" V' m4 V, c
在ADSC转分化中也出现这样的情况，如图B所示。原代ADSC(A)，化学诱导一次(B)，两次(C)( \" a  V. g9 O) V; P. t5 [- S2 R
AP染色：原代的ADSC(D)，对照组(E) ，实验组(F)。
# C% f; H; a; }& T这样的聚集的细胞的CD34荧光染色时阳性的，可能出现内皮性的转分化。培养基的细微改变都可能使干细胞发生改变，无法使肿瘤性变化还是分化，不过如果是瘤性变化的话细胞可以无限传代，分化的细胞是不能无限传代的，几代后形态就会衰老。楼上所说的基因突变也是很容易的。因此，楼主还是多做几次试试看，呵呵0 z: E* a4 ~' w. ^4 S7 R8 A