大鼠脂肪干细胞长期培养自发恶变

gh2010

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正常组织，正常受体小鼠

hluoli

bin# S( v' Z5 t4 b  @6 r2 t8 I# d
你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。

hluoli

bin
+ ~0 n$ ]3 u  p9 h* b你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。" \$ W" w/ n, ^
请问这是指原代还是传代细胞培养？/ Y7 `1 _7 K' z0 [
此外，bFGF的浓度和量各为多少？
, U( L1 I2 M; ~! [) a6 e2 w谢谢！

hluoli

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0 H# ?# C4 @# Z: C# r3 b  h; Y6 ^$ a" G# q. ~0 t

3 a" W) ~& Y1 |0 E& C5 j, nbin
# M3 ?: ~' G0 W+ o+ B7 L: p  y你好，你在帖子里提到：以前在实验室培养干细胞都是用血清的，现在公司的研究是用无血清培养基，但是加了bFGF刺激，脂肪干细胞长势很好。2 L. L( H$ a( t# L1 V% Y) L
请问这是指原代还是传代细胞培养？/ F* M* f3 o* h" _$ O
此外，bFGF的浓度和量各为多少？) ?2 r5 Z: Z8 L5 F- N2 j8 M
谢谢！

bin

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& {5 q2 x$ A7 I1 Y+ h. \6 l. @% |8 \3 \2 ~
原代培养和传代培养都使用了，至于bFGF的浓度属于公司机密信息，我在这里不方便透露，你可以做一个浓度梯度，达到自己满意的生长速度的最低浓度及可以，还有其他的细胞因子也可以尝试一下，祝你实验顺利。

hluoli

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9 y3 C- P; b: L
  J- M  Q9 Z" H1 e# z谢谢你的建议。- @* n: r- t# o6 T
第一次养脂肪干细胞居然就出养出来了，而且传代长势很好，二天就长满了，想问问，一般脂肪干细胞极限可以传几代？
6 U6 t% r; L9 a( l& s$ X# x还有一个问题，我的细胞中有很多的小黑点，这里有个前提，细胞长势不错，我考虑是代谢物，老板觉得小黑点太多了，向污染，我同事认为有可能受支原体衣原体感染，我传一张原代的第7天，请大家帮忙看看小黑点是什么？

hluoli

晕，发不了图

细胞海洋

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6 V; N0 Z0 B; g& l( w) J6 w/ e. n* W' d5 G" X" t
单个图片不要大于1000kb 可以截图

bin

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$ c" M2 C  l8 Q/ K
8 v* X/ B9 H5 j2 Y一般来说脂肪干细胞可以传很多代的，以前我们实验室的经验是3代以上才算比较纯的了。这个要看你的需求是什么了，根据自己的需求，再根据文献来确定，我的建议是不要传太多，我记得以前有一篇文献报道BMSC传5代以上就会具有致瘤性。如果觉得细胞被污染了，尤其是支原体污染，我建议你把整套设备和试剂都换了，支原体主要来自血清，购买进口血清，养细胞不要用国产的。

daiying5200000

0 s+ X9 c2 K$ z
( g4 E- Y$ {; m& K7 R! W
我之前也有类似的情况，出现在成骨实验中，细胞密度高，培养时间长是那样了。; H/ S5 c" d: r
在ADSC转分化中也出现这样的情况，如图B所示。原代ADSC(A)，化学诱导一次(B)，两次(C)
9 e7 m2 [# y1 \* d+ u) |- O3 S) T. [$ wAP染色：原代的ADSC(D)，对照组(E) ，实验组(F)。* M6 A  e" Q* N4 n1 f( t
这样的聚集的细胞的CD34荧光染色时阳性的，可能出现内皮性的转分化。培养基的细微改变都可能使干细胞发生改变，无法使肿瘤性变化还是分化，不过如果是瘤性变化的话细胞可以无限传代，分化的细胞是不能无限传代的，几代后形态就会衰老。楼上所说的基因突变也是很容易的。因此，楼主还是多做几次试试看，呵呵
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