传代后细胞这样怎么办？

fay898

人骨髓间充质干细胞，第一次传代已经7天了，细胞长的很奇怪，求解！！！
- W! _, q' P) e  y
0 v, J' H/ o. r# f里面大大圆圆的是什么啊？？？是MSC么？细胞还要留着么？！9 B  a. q) H1 _$ \4 l& c" D7 g
望各位指教哈！！

cherrysung

这是原代细胞第一次传代？什么来源？

孙帅帅

里边圆圆的肯定不是间充质干细胞，间充质干细胞是成纤维状贴壁细胞，胰酶消化后看到的才是圆形的细胞。原代培养的怎么样？你是用什么方法处理的脐带啊？是不是支原体污染？

猩猩

你在传代后有换液么？？？你在移动培养皿的时候，圆点是否也移动？？你确定圆点是贴壁生长了么？？若没有贴壁的尝试下用培养液冲洗掉

yinfuhua

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6 X3 x( Q2 X9 s$ Y$ [3 S6 h1 L原代生长如何？现在细胞的状态不好，感觉再培养下去也没什么意义了。骨髓间充质干细胞原代培养时生长较为缓慢，传代后生长会快些。传代时要注意细胞密度（照片上看你的密度太低了），3d左右即要根据情况换液，注意无菌操作，保持良好的生长环境，细胞才能长好。

fay898

回复 cherrysung 的帖子4 G( A4 {! d3 P5 \" O2 G

+ i" u+ A  i: ]对的，是第一次传代。人骨髓间充干~

fay898

回复 孙帅帅 的帖子
2 x% V) \+ [$ f" P( B
- s( P. _! y: l6 Z. K9 g我用的人骨髓，Ficoll分离后直接培养。培养液中有1%的双抗。原代MSC簇有点老化，养了20天才传第一代~~~纠结了~~~

fay898

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% p6 z/ A2 f! G4 F* ?3 G这是刚刚全量换液后的照片。细胞传代后已经换了1次液了，这是第2次换液。移动培养皿时，原点不动的~~没敢冲洗~~下次换液我试试~~

fay898

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% M+ g0 j* q3 w谢谢您！原代接种了2皿，长的比较慢，虽有MSC簇，但比较少；22天第一次传代，细胞很少，细胞簇中间有点老化；2:1传至10cm皿，已经换液2次。麻烦请教下，初次接种密度多少为宜？！

yinfuhua

回复 fay898 的帖子9 }( x3 e  W2 h$ Y2 Z% i: @1 m

; E+ f& p2 ]+ T' ~3 L不客气。一般初次接种密度大约在2-3X10^6次方。你原代培养时间过长，所以老化严重。如果看细胞数量不多，甚至可以1:1传下代，然后继续培养、换液。再根据细胞生长状况决定下一步的传代。你试下看看，这样会好些的。