请教免疫荧光的一些细节问题

请叫我晓白

我做心脏的免疫荧光，因为我们切片是要送到其他科室去请人切片的，所以想取完一批标本后一起送去切片，那么取出的心脏该怎么保存呢？看到有人说用多聚甲醛固定，蔗糖脱水沉底，然后-80度保存。是这样吗？
$ }" z' V/ V2 P# H5 Y' p另外必须用过氧化氢处理及血清封闭吗？我看到有人的方法没有这样处理。/ K1 a3 \5 I; F$ C4 I4 @4 t* r
如果有前辈给出详细步骤，就万分感谢啦
% m% X7 d& E" R; \" Z新手，请各位多指教啊

monk125

幸运的话 会有个研究心脏的那个组的人给你答复 坐等

frankieisme

3 c6 b; l; G* a+ H3 S* Q8 z2 @

$ s0 @9 G4 J$ w5 S# ~& E回复 请叫我晓白 的帖子0 U, n: `5 _  P6 W) a& q- f, ~$ O

- e8 x/ |( p$ L! |6 H如果只是做普通的免疫荧光，10%的甲醛常温固定不低于24小时，送标本去切片，回来后按常规脱蜡，封闭，抗体孵育，镜检；如果是要查新鲜GFP则需要冰冻切片，新鲜标本在4%多聚甲醛固定后用OCT包备，液氮上迅速让其冻成块，随后就可切片，封闭，抗体孵育，镜检。

请叫我晓白

回复 frankieisme 的帖子- x" _5 Z. S2 @2 `  W2 N

$ k# a( |" X5 z2 F- u2 g我看到有人的新鲜标本没有固定 OCT包埋，取下心脏后直接拿去冰冻切片，然后丙酮固定，封闭，加抗体镜检。而有人就如你所说，固定过夜后，蔗糖脱水OCT包被这样处理的。到底哪种好些呢？我可以取下心脏后放在冰块里送去请人切片吗？切片后-20保存可以吗？

frankieisme

回复 请叫我晓白 的帖子& [: s9 J9 f2 J* |) b
9 T) @' B5 t" k+ s8 P" `6 v4 P
你可以准备好液氮,取好标本后用OCT包埋后再送去切片,之后可以-20度保存。如果要检测GFP，最好当天染色镜检！

daviddow

-20度啊就可以，不要要处理一下

hbs08230

不用很复杂，
. X# a& Z( _* w0 V* h) [, Z石蜡切片：新鲜组织在福尔马林（3-4%甲醛）浸泡48小时，换入70%乙醇浸泡24小时，之后可以在70%乙醇里4度长期保存。（2年内都可用）2 j/ a% ~/ |# G
冰冻切片：新鲜组织直接包埋OCT，放在干冰或是放入-80℃直到冻结实，之后一直存在-80℃也可长期保存。4 U% x2 p- f9 Y% [
$ E& A% M) Z7 T9 u