求助外周血造血干细胞分离和扩增

xinxin5332621

最近在做外周血造血干细胞分离扩增，存在以下问题，望各位指导
4 h$ j- R- @, ?. E( {5 K( x% W1、分离方面：目前应用免疫磁珠分离cd34+,人外周血未经动员，所以细胞数量相当少，想请问免疫磁珠分离和流式分选两种方法，在兼顾纯度和细胞数量时如何选择
- O. n6 D! v- H7 z# `5 ]+ b2、扩增：以前我做的是脐血造血干细胞培养，长的还可以，可是同样培养基养外周血来源的造血干基本不扩增，请问有没有养过的同仁，帮忙看一下9 }' `- r( J+ S( J, ]& z5 X& o
  以往IMDM+血清，SCF、flt-3、il-3、TPO' D* X8 m' Z! ~4 x/ C4 x
   最近改用造血干细胞专用无血清培养基仍然扩增不理想

fish_zbw1985

1:对于丰度极低的目标细胞分选，首选磁珠阳性分选，对细胞的损伤较小。流式分选适合分选丰度高的细胞。按你的描述目前先进的高速分选每秒过几万个细胞算，你想收够足够细胞耗费时间太长，而且你要标记这么多的细胞光流式抗体也要费很多。
6 K3 e1 ~: R8 o; M3 r2：貌似还需要IL-6?

yaolinzhang

建议首选FACS；另外，一定要用好的培养基，因子用量及组合须合理，否则很难扩增。HSC可不好伺候！

yaolinzhang

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: Y* y" Z8 D- k' Z: k0 v4 _" l( P" H+ }5 r) Q
建议首选FACS；另外，一定要用好的培养基，因子用量及组合须合理，否则很难扩增。HSC可不好伺候！

xinxin5332621

谢谢二位的意见，我也打算继续用磁珠阳选，我在查查细胞因子，谢谢

细胞海洋

回复 xinxin5332621 的帖子8 O/ S. B, X1 K& ]6 V% W: G
* Y/ Y2 |( `! D" Z/ L7 z3 F
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样& y$ G; f& m, q4 v0 S/ @: u( L5 |
# R. ?5 V; v" J1 |4 Q; E
否则他会看不到

禁虚度

正选比较好，外周血本来造血干细胞较少，IL-6还是需要的

xinxin5332621

回复 禁虚度 的帖子
2 R& p5 k1 M; R! E; Q
; M+ u# h' S2 x% \; N- Y谢谢，我正在查IL-6相关的文献准备试一试

xinxin5332621

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, l# B( H. d3 `: J; S
9 X# J/ i* l7 q2 \) R8 n谢谢，但是会不会有人质疑所分离的外周血造血干细胞的纯度问题。当然理论上讲阳选应该纯度90%以上。

xinxin5332621

回复 fish_zbw1985 的帖子0 R$ m- g2 E- g  Q3 C1 z/ u+ ^
/ n+ {$ t( O" O1 M' M3 B7 A0 p
谢谢，我继续磁珠分选，并查IL-6.# T! K: d% s% \+ R