关于原代小鼠BMSC传代的问题

沁蓝之城

原代细胞差不多长到6天的时候，平地已经铺满了，梭形的细胞也有很多。我用不含EDTA的胰酶消化的，大约消化了5~6分钟，但是没怎么消下来，我怕消化太久会影响细胞，所以就加培养基终止了，最后用吸管充下来了。1传2，但是现在培养瓶里细胞量很少，而且状态非常不好。这是胰酶的问题还是污染的问题？（培养基并没有浑浊）PS：我同时养的EPC，原代的时候也很好，但是一传代细胞都漂起来了。
1 _: x% @- `  P/ U7 j7 U求高人指点！

chenguangyu

你的既然原代长得挺好应该不是原代细胞污染的问题，你的胰酶什么时候配制的，配制好之后检测了没有，储存在多少度，有含有EDTA的胰酶会好一些，消化更温和，对细胞损伤更小，另外原代进行传代时不要等到都长满了，长到80%的时候就可以传了，如果长过了，细胞很容易衰老了！祝好运

沁蓝之城

回复 chenguangyu 的帖子8 }  x; ^4 \" R) \9 F9 m$ l+ R! Q* N

6 L* h# \6 C* U' y: D谢谢chenguangyu。我的胰酶不是配的，是买的gibco的瓶装胰酶，存放在4度冰箱的。

aulenuyah

感觉可能的原因有：胰酶消化的时间有点长；原代细胞长得太满了，传代的时候一传二细胞太密，可能细胞会容易老化
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1 B" Y; |/ w+ g祝好运噢~~

孙帅帅

我们用的是含有EDTA的高效胰酶，37℃消化一分钟就可以，但是我们消化的是MSCs。不知道是不是你们的胰酶有问题~~

smallboar

BMSCs原代培养的细胞贴壁很牢，的确不太好消化。用巴氏管硬吹下来，对细胞损伤挺大的。
/ R- k3 U+ p9 {0 H- A  J& _' g( K我的经验是：8 V* }# i# y" w2 m2 t1 b
1. 消化前用PBS多洗一次，量稍微多一点；
' W  K( r6 g# k& s( x' t2. 分次消化：即加入胰酶后如果有部分细胞已经飘起来了，先吸出来放到离心管理，加入带血清的培养基终止，剩下的细胞接着重新加入胰酶，继续分次消化；
  B- }1 Y7 \* R3 @3. 如上面的战友所说的那样，不要长得太满才传代。
! h" S# z  V& H2 C; ]希望对你有帮助。

沁蓝之城

回复 smallboar 的帖子' M% h$ N  A  g1 t  a( R9 i* X
+ a: G- [. J4 l  ^
感谢smallboar

沁蓝之城

回复 孙帅帅 的帖子( x! l9 ?2 Y$ K) B9 u/ P
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我已经买了EDTA的胰酶

沁蓝之城

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  s  _6 v1 H, [  G2 j9 F  C
  p' o( d& j% Y) O嗯，我重新养了一批，正在观察中