嘌呤霉素的使用

若兰汀

大家好，我的实验中有一部分是要用慢病毒转染人ips细胞进而敲除某个基因，为了稳筛出knockdown目的基因的细胞，准备用嘌呤霉素筛选。现在买来了Gibco的嘌呤霉素，在-20贮存，不知道分装的时候要在4度解冻还是常温就可以解冻，另外，人ips的正常工作浓度大概为多少，我想在工作浓度得基础上，来设梯度，做过的大侠们请赐教，多谢

ciweiyuan

我觉得用抗生素筛选ips稳转株的方法不是很可靠，因为ips是呈现克隆状的，外周的好感染，可是位于中心的ips很难感染进去，这样筛选了之后，不易分化的中心ips反而都死掉了，我认为最好的方法是用打靶的方法敲除比较好。/ z2 }' Q- k, Y( H) R5 f
此外抗生素室温融化即可，我没做过ips的筛选浓度，但是普通细胞株是用500ng/ML，建议楼主去查paper。: e* e& O3 @* D  r  {
希望可以帮到你

zpzp0312

慢病毒转染，理论上是能够转染遍及整个集落的。
6 J- y0 P+ z( c- y想知道楼主通常一代细胞培养几天？计划在接种后第几天进行转染？

zpzp0312

慢病毒转染，理论上是能够转染遍及整个集落的。2 J$ \6 P# E& z
想知道楼主通常一代细胞培养几天？计划在接种后第几天进行转染？

ccnuld

在哺乳动物细胞系中有效浓度范围1~10μg/ml,不同细胞可能耐受能力不一样，所以需要在这个浓度范围内再做个梯度看看