帮忙看下小鼠BMSC

wbs1986

最近用骨片法分离培养小鼠BMSC，小鼠为12周，年龄是有点大，原代培养骨碎片附件长出形态较好的MSC，但增殖较慢，未完全融合，且有杂细胞（虽然比以前全骨髓法培养杂细胞少）。传代后细胞虽继续增殖，但杂细胞依旧很多，而且形态发生很大变化，都不确定是不是MSC了，这两张是P2代图片，请各位看下除了很细长的杂细胞之外，其余的是不是MSC。是状态不好，还是根本就不是，非常感谢。
6 l; ]4 X+ w. f# z2 T. l; o
5 B6 e" d, C, n( z! D" j

gghywtfz

有部分细胞扁扁的是分化掉了吧。- _, ?. O# _9 F3 H6 }
没什么关系，消化的时候后掉下来的那些细胞就是这些分化掉的细胞，控制好消化时间就好

bty007

我也是用骨片法养小鼠msc的，有时候拍出来照片细胞全部特别扁，后来发现是显微镜的问题，不知道你的是不是也跟显微镜有关系，感觉正常情况下第二代细胞应该不会全部像分化似的没有立体感吧

shagu

我认为你的细胞状态挺好的，立体感也行，至于发亮的细胞，和显微镜有关，我的P2时，细胞都爬的扁扁的，伸出突触变为多边形细胞，P3时鉴定结果纯度符合文献MSC要求，所以继续观察吧！另外，细胞形态不能说明问题，主要的是分化能力测定和标记为鉴定。个人意见，仅供参考！

wbs1986

回复 gghywtfz 的帖子
3 N* W) n9 t% r5 O! ^' @/ F' l
5 X$ n, z5 w. S% ?这两次传代的时候消化都挺快的，1-2分钟就大部分细胞都消化下来了，下次再消化短点时间看看

wbs1986

回复 shagu 的帖子& i( h& w- z0 B/ u4 _

* d1 v" r9 ~" {, |4 l, O* m我这几天再做下分化实验，图中发亮的细胞很多很细长，像这种杂细胞很多，到P3代鉴定时应该纯度不够吧。另外现在有个疑惑就是那些扁扁的细胞一块一块的，都不知道是几个MSC，还是很多MSC聚集在一块。

fengxiwu

回复 wbs1986 的帖子
  \- p4 T3 _5 _. G2 X8 _6 @, u4 d+ K' _* D8 h0 Q
不知是否有条件尝试一下密度梯度离心分离骨髓单个核细胞培养MSC，当然，也要看实验目的，有没有必要。MSC本就是一群异质性的细胞群。

wbs1986

回复 fengxiwu 的帖子  P+ j& x7 G) f  D: X- o

; X( o5 ?. H  h# [% k5 Q7 j7 h" B以前是一直用骨髓密度梯度离心分离后培养的，但效果很不好，基本都是杂细胞。

fengxiwu

回复 wbs1986 的帖子% _0 M+ w/ z& _) {# ~5 H$ Z
) p. p. v# S& X' f7 {# D% _
我做的是人的骨髓细胞培养，人用的梯度离心液和老鼠用的是不一样的，间质干本来就是一群很杂的细胞，异质性很高的。而且生长是一个缓慢的过程，间质干是慢慢爬伸的，逐渐变的更加的细长呈梭形（大部分），也有其他多角、宽大等不规则形的。
: Y$ h4 l' R, ^2 [7 r     基础培养基，血清类型及浓度，很多因素影响细胞的状态。多查资料，文献看的多了，加上你的经验积累，会越来越顺利的。+ i+ X) Q3 m5 q; G
  

cuizhuzhu

你多养一段时间试试！我的也这样，传到第三代突然就好了！血清质量很重要！