请问干细胞的悬浮培养知怎么做的？

fwj81

这里还有一个问题，形成EB估计要一周，可是文献上说两天换一次培养基，那么悬浮状态的ips细胞怎么换液呢？

katysong

1. 悬浮法是最早被采用的方法。将ES细胞Dispase消化成小团块或机械法切割（比平时传代稍大一些）后的悬液接种于细菌皿或超低吸附皿中(干细胞培养液不含bFGF)，培养7天左右即可形成EB。缺点：鼠ES细胞自动聚合，每个聚集体里ES细胞的数目不同，人ES克隆集落大小不均，又受消化的影响，所以此法形成的EB大小、形态各异，分化同步性差，分化能力存在差异，且EB之间可能彼此黏附聚集（EB凝集）。2 X7 r# H: R, I4 c2 \! m+ s& Q
2. 悬滴法现被广泛应用。调整细胞密度为5*104/ml，将20-30μl ES悬液（每滴约1000个细胞）滴在培养皿盖子上，将皿盖翻转盖在底部含PBS的培养皿上（也可适量加点FBS），因表面张力的作用细胞会聚集在液滴最下方，培养两天后可见ES聚集成EB，随后将EB转移至低黏附皿中进一步培养成熟。缺点：悬滴液体的体积受表面张力限制而局限在50μl以内，且在悬滴形成过程中不利于直接观察EB，操作较繁琐，难以用于大规模培养。

fwj81

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9 n8 t4 g$ N  @& z谢谢katysong，请问EB在培养的过程中如何换液呢？$ m. `- p" l" f. Z2 N

katysong

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隔天换液，每次换液时用2毫升的移液管轻轻吹打几下后收集到一个15毫升离心管中，自然沉降，然后去上清，有新的培养液重悬后接种至培养皿中即可。

绝对忠橙

楼主是分化什么细胞？