求讨论：悬浮细胞诱导iPS

DNAngle_RNA

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nature protocol有成纤维细胞做iPS的，没找到悬浮细胞的……

Jonathan

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你买来的病毒，怎么知道没问题？有做过测试么？找一点293之类的，先做一个测试，才知道病毒有没有问题

DNAngle_RNA

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病毒是从millipore买的，应该信得过吧，而且是四因子连在一起，不带荧光，测试起来很麻烦……

jj1987

ips悬浮培养重编程，加拿大有几个课题组做的比较好。

刘森泉

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请问你做的血液细胞是小鼠的还是人的，能具体讲一下protocol吗？包括用的是什么细胞，单核呢还是流式筛选的某种细胞？什么方式转染的？4因子的启动子用的是什么？因为血液细胞培养比较困难，而且转染也不容易，一般的CMV启动子难以在静息的干祖细胞中表达。非常感谢！

Jonathan

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人的ips，可以用T或者CD34+的，买个kit，直接分离后，可以用慢病毒或者episomal的方法。慢病毒我是自己包的，忘了从哪个公司买的，4 in 1，Dox启动的。MOI=10的话，效果很不错。episomal的话，用yamanaka的，从addgene买的，直接nucleofetion，然后扔feeder或者matrigel上面。一个星期就有克隆了。

刘森泉

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谢谢！内地怎么问Addgene上买质粒啊？通过代理公司吗？

老十

悬浮细胞培养就是那个Nature method 那个。但是你用lentiviurs 直接诱导。

Jonathan

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内地直接可以买的。他们公司在大陆都有代理公司的。

Jonathan

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