求讨论：悬浮细胞诱导iPS

石山巨石

reprogramming kit http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Induced-Pluripotent-Stem-Cells/Sendai-Virus-Reprogramming.html 略贵了一点点 不知道能不能接受

sirius_zou

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/ [8 c+ J3 U. i, y# u7 K
6 p, s; B9 ?3 t; B) I3 n( d你好，我正在做人CD34细胞诱导ips，一直诱导不成功，用的是程临钊的episomal质粒，请问你用的yamanaka的质粒是具体哪几个呢？有木有addgene的货号啊，还有有木有yamanaka的参考文章呢？非常感谢

sirius_zou

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. T) O, z9 `" @
" w) K! }: T) H. V2 H5 Q" |您好，感谢您的回复，我还有一些问题想请教您：
3 ^. `# h- a7 U. j: ?0 Z( H- j2 x①您用的yamanaka诱导CD34+的episomal质粒是不是Y4啊：pCXLE-hOCT3/4-shp53-F（addgene：27077）；pCXLE-hSK（addgene：27078）；pCXLE-hUL（addgene：270780），诱导效率如何？
* s/ f7 Q& j9 m②转染后的CD34+转入feeder后细胞板需要离心帮助CD34+贴壁吗？yamanaka的protocol没有离心，程临钊的protocol离心了。6 h' J) o& |; l* o# X& K
③转染后的CD34+转入feeder前CD34+需要离心收集细胞沉底再用新鲜培养基重悬吗？还是不更换含有转染液的培养基直接转入feeder？, U/ h4 C, p3 ?0 Q+ d# C, M
④episomal质粒要求高吗？求推荐质粒提取试剂盒！去类毒素+高浓度质粒（>1ug/ul）提取？是这样吧。。- _* ^  I; j* ^- f8 C* P% n. d
; ]( C! K5 A% J& ~
问题有点多，我一直诱导CD34+重编程一直做不出来，非常感谢您的回复！
. ?& S$ B. R: ^, p, F1 t祝工作顺利！

greed

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" p% P8 [$ h3 _' u3 k
- r4 z9 |1 p! Y) z文章已经没了 被撤了

573639471

回复 Jonathan 的帖子) }- S3 Q& i" m1 T7 |
$ }, |, A$ E  H
你好，请教下，脂质体转染有做过吗，我现在正在做，然后有个小问题，corning matrigel HESC-qualified matrix，稀释多少倍用啊

崔崔

要考虑本身悬浮细胞状态问题 ，还有诱导培养基是否正确

wang331212

楼上说的很好 学习了 谢谢

wang331212

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, q9 N1 W% `& L/ ~' P0 i/ p" W& v- y3 m! K. w2 {
同学习

陆萌

回复 Jonathan 的帖子6 v  J* S: U. k9 z6 D
4 Q: L6 _5 @$ V9 X) r$ A) i
您好，请教一下，在血细胞诱导过程中，病毒感染后转移到feeder上，变为干细胞培养基，这个时候feeder状态马上变差，请问您有遇到过这种情况吗，能否帮忙指导一下:handshake