求讨论：悬浮细胞诱导iPS

石山巨石

reprogramming kit http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/Products-and-Services/Applications/Stem-Cell-Research/Induced-Pluripotent-Stem-Cells/Sendai-Virus-Reprogramming.html 略贵了一点点 不知道能不能接受

sirius_zou

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; D- V: y4 _7 E7 _* V
' @: {2 T7 ]2 b  ?' D6 P9 z5 m" ]  r! {你好，我正在做人CD34细胞诱导ips，一直诱导不成功，用的是程临钊的episomal质粒，请问你用的yamanaka的质粒是具体哪几个呢？有木有addgene的货号啊，还有有木有yamanaka的参考文章呢？非常感谢

sirius_zou

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6 ]* B7 }2 P& d: s( o
! R& f  y9 [: ~. l! o4 P您好，感谢您的回复，我还有一些问题想请教您：% E7 v! I1 R, A3 K2 |: i! Q/ x
①您用的yamanaka诱导CD34+的episomal质粒是不是Y4啊：pCXLE-hOCT3/4-shp53-F（addgene：27077）；pCXLE-hSK（addgene：27078）；pCXLE-hUL（addgene：270780），诱导效率如何？
* K4 J  o' D2 u' V; p, N②转染后的CD34+转入feeder后细胞板需要离心帮助CD34+贴壁吗？yamanaka的protocol没有离心，程临钊的protocol离心了。
& |; v4 v* B$ \5 |( y% I: n! s6 `③转染后的CD34+转入feeder前CD34+需要离心收集细胞沉底再用新鲜培养基重悬吗？还是不更换含有转染液的培养基直接转入feeder？
! [! M4 h  I" a④episomal质粒要求高吗？求推荐质粒提取试剂盒！去类毒素+高浓度质粒（>1ug/ul）提取？是这样吧。。
; A) e8 A2 i) D" y
# J6 e' r( X6 T问题有点多，我一直诱导CD34+重编程一直做不出来，非常感谢您的回复！
& Z2 Z# ?4 D; D4 Z1 t1 n祝工作顺利！

greed

回复 jiaozi 的帖子3 z: b- S' a. M% {

, m/ [6 o+ A4 ?" z文章已经没了 被撤了

573639471

回复 Jonathan 的帖子/ V& _* P. Y8 U

  J! g8 o1 F1 D: E. @) D你好，请教下，脂质体转染有做过吗，我现在正在做，然后有个小问题，corning matrigel HESC-qualified matrix，稀释多少倍用啊

崔崔

要考虑本身悬浮细胞状态问题 ，还有诱导培养基是否正确

wang331212

楼上说的很好 学习了 谢谢

wang331212

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' X1 g% W! h4 J
6 g( x+ D8 ]) U8 W9 s1 F同学习

陆萌

回复 Jonathan 的帖子0 O7 v* s) q5 Q7 q" W0 q- M3 q

' m, z8 z! w9 }; c您好，请教一下，在血细胞诱导过程中，病毒感染后转移到feeder上，变为干细胞培养基，这个时候feeder状态马上变差，请问您有遇到过这种情况吗，能否帮忙指导一下:handshake