脐带间充质干细胞培养问题

get0715

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4 _5 C* W2 t" Y, N; \: ]# v间充质干细胞还是比较好消化的，你可以去掉EDTA，另外胰酶的浓度也可以降低，可以试试将0.25%的胰酶稀释三倍使用。如果你是用瓶培养的话，可以将冷的胰酶加到瓶的另一侧，放在培养箱中几分钟，待胰酶预热之后达到最佳的活性，将培养瓶翻转，经镜下观察细胞形态，多数细胞回缩成圆形就可以拍瓶，将细胞震荡下来，瓶上有极少数细胞没有消化下来，你可以注意观察一下，那些细胞多数为形态极不规则的细胞，不要也罢，这样传代也是纯化的过程。

get0715

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我们用0.05%的胰酶（不含EDTA）消化都没问题，2到3分钟就消化下来了。这个可能跟培养体系有关。

三月桂花香

欢乐桥 发表于 2013-5-29 08:11 $ M7 ]% F3 [* ^* F7 g
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7 W8 P1 n3 N% v- m  Q& e. D" R; l亲，有的时候我们用0.25%的都不好消化呢，你的0.125%能好消化吗？

/ r8 D/ @% f4 P$ x$ A$ u还算好吧，我们一般消化四分钟，融合率70-80%左右。

ganggangtry100

如果刚刚开始细胞形态很好，说明培养基应该没有问题，尝试着提高细胞接种密度，看看效果怎么样。

欢乐桥

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嗯，好的，我现在传代基本都是1:3-1:4。

孙帅帅

细胞变大说明细胞已经老化。是不是你在消化传代之前，细胞密度过大。细胞大约长到80%的时候马上进行传代，要避免细胞之间发生接触抑制。我们一般都是37℃培养箱中消化1min，当然胰酶的质量不一样，消化时间可能会不一样。

欢乐桥

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8 y3 J# u% H: S7 t( q/ A原代刚养出来没传2,3代就老化了吗？

孙帅帅

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曾经有一次我们做的脐带原代就是那样，老化的很厉害，重铺时候细胞就长得很大。以前都没有事，就做的那根脐带原代有问题。这些不明原因的细胞老化与供者体质有很大关系。另外，如果每次养脐带MSCs细胞状态都不好，要考虑一下是不是培养基配方有问题。

wf78365421

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# N# o) M9 M/ K可能是分化或者老化，可加点生长因子试试

CELL007

我们培养的MSC,长到2到3天大约融合度达到85%到90%的时候，就开始传代。消化时用0.05的胰酶（含EDTA)的，150的瓶子加2ml胰酶，2分半的时候就几乎全消化下来了。然后再加5ml的旧的培养基终止消化。反复吹打细胞就全下来了。