脐带间充质干细胞培养问题

llm

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- M9 A7 G) I+ Q( v/ X* u4 R$ x$ A" K6 ]3 m
消化时间貌似有点长，消化过了，我们一般是0.25%胰酶+0.1%EDTA消化1-2min,在显微镜下观察，大部分细胞边缘卷起时加入含血清培养基进行终止消化，不用等到全掉下来，然后再用移液枪轻轻吹几下就能全下来了

lic126

回复 欢乐桥 的帖子7 ~. c7 ]1 W1 z# K  c4 X
1 D! V" Z4 b4 }2 [; R
弱弱的问句，中和以及离心的具体情况呢...?而且3分钟是有点点久。我们一般一分半到两分钟即可。。主要是你要选择性的到显微镜下看消化的实时情况。同是MSC，不同脐带来源的，或者不同批次的酶，消化效果都是会有差异的。

欢乐桥

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, L4 n& e/ s% _9 G& q3 P+ S! L
8 }% w3 B3 u% o- ?; b我说的3分钟比较官方一些，其实实际上是用不了的，呃......用含血清的培养基终止也试过，还是没找到问题出在哪。。。老师说是没选对种子，要继续再养原代。

欢乐桥

回复 lic126 的帖子) `: y8 t8 O1 A1 [, M' O4 X: e& c% Y

3 l2 |4 s$ y5 y# s9 n之前消化之后都是用生理盐水收集到离心管中，1500rpm/3-5min，后来形态不好之后，尝试用含血清的培养基来终止胰酶的作用，然后收集起来离心。

daifenghao

回复 欢乐桥 的帖子4 ?( @' L+ v( M& U
+ [+ G7 K( |, S( I  G  f
我们一般是1000转离心

欢乐桥

回复 daifenghao 的帖子
, G% n, ?& ?2 I- o$ g6 Y
7 {* l- i; ]  E: |8 |好的，下次我降低转速试试，谢谢

wuzhongqi

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$ g+ L& M' P6 _8 L% U0 p& v+ O
( Z! z% E$ D+ B" ~3min  消化有些长了 ，晃动培养瓶，在显微镜下观察，当细胞边圆，大部分细胞都掉下，立即终止消化

欢乐桥

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. B5 e. Y+ S+ ~- i: d1 e' l- [# c& I/ q" d" K/ n8 E  D
嗯，实际上是不到3min的，有时候消化后细胞不是散成悬液，而是成片的脱落下来，收集后会有很多絮状沉淀，也吹打不开，这样的细胞是不是老了？

三月桂花香

我们用的胰酶是0.125%消化平置大概四分钟终止消化，大概70-80%的细胞变圆脱落，然后转移至T75瓶。

欢乐桥

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亲，有的时候我们用0.25%的都不好消化呢，你的0.125%能好消化吗？