脐带间充质干细胞培养问题

llm

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& ]' }" V: R4 d消化时间貌似有点长，消化过了，我们一般是0.25%胰酶+0.1%EDTA消化1-2min,在显微镜下观察，大部分细胞边缘卷起时加入含血清培养基进行终止消化，不用等到全掉下来，然后再用移液枪轻轻吹几下就能全下来了

lic126

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+ a% f% q  g. H
弱弱的问句，中和以及离心的具体情况呢...?而且3分钟是有点点久。我们一般一分半到两分钟即可。。主要是你要选择性的到显微镜下看消化的实时情况。同是MSC，不同脐带来源的，或者不同批次的酶，消化效果都是会有差异的。

欢乐桥

回复 sdzysp 的帖子/ ]! i0 s" `" s6 g2 P# I' y/ B9 E

4 r5 s+ P* ^7 I* d# h- q我说的3分钟比较官方一些，其实实际上是用不了的，呃......用含血清的培养基终止也试过，还是没找到问题出在哪。。。老师说是没选对种子，要继续再养原代。

欢乐桥

回复 lic126 的帖子  _$ n7 @2 g- G  U$ s
9 `9 V0 Y, {' i- |" P* D
之前消化之后都是用生理盐水收集到离心管中，1500rpm/3-5min，后来形态不好之后，尝试用含血清的培养基来终止胰酶的作用，然后收集起来离心。

daifenghao

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& B5 G; i3 P4 j( C1 o) k: L: S' Z4 @% p/ G$ E' u* w0 R
我们一般是1000转离心

欢乐桥

回复 daifenghao 的帖子
9 Z" w0 q: C* I2 t' U$ L! r
; O$ q4 Q9 }5 f2 ?1 e6 d好的，下次我降低转速试试，谢谢

wuzhongqi

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; l- x! U& D9 x6 o6 p6 R' m- ^' X4 e
; n4 W) ~7 h0 N0 U3min  消化有些长了 ，晃动培养瓶，在显微镜下观察，当细胞边圆，大部分细胞都掉下，立即终止消化

欢乐桥

回复 wuzhongqi 的帖子" W: H: A2 E4 I

6 F4 d( a! v  s0 _5 ^4 G嗯，实际上是不到3min的，有时候消化后细胞不是散成悬液，而是成片的脱落下来，收集后会有很多絮状沉淀，也吹打不开，这样的细胞是不是老了？

三月桂花香

我们用的胰酶是0.125%消化平置大概四分钟终止消化，大概70-80%的细胞变圆脱落，然后转移至T75瓶。

欢乐桥

回复 三月桂花香 的帖子% O3 s+ s2 E  Y6 G1 o1 z4 ~
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亲，有的时候我们用0.25%的都不好消化呢，你的0.125%能好消化吗？