脐带间充质干细胞培养问题

欢乐桥

最近培养的脐带间充质干细胞，原代养出来的细胞形态很好，但是只要一传代，细胞开始变大，成多边形，传到5-6代就不能用了，请问是什么原因？

ytumuyangren

你用的是什么培养基？有一种无血清的培养基——Excell非常好用，在1-3代时培养扩增，之后就可以换为其他培养基培养，我们就是这么培养的，效果不错，都能传到10代（我们只传到十代）看细胞的状态，应该还可以继续往后传。

llm

脐带间充质还算是比较好养的细胞，你是不是消化的时候消化过了，含血清培养基和无血清培养基现在都能养的很好

lic126

首先还是考虑下你的消化试剂以及消化方法是否合适吧。。。。

Tim

4 {) k- A! |+ U5 B" f# b! n4 u8 ?" `' J: U$ e' L2 A" M$ [0 T! L% n
回复 欢乐桥 的帖子7 Z& I+ z3 o4 I! E) \" _

  c5 j* n' r- [( j# \楼主新手！？？？操作注意轻柔。消化不要太狠！制作细胞悬液的时候千万不要产生气泡。不要老观察它放培养箱最起码俩天后再观察！《不要老晃动瓶子》

欢乐桥

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我们这的消化液用的是0.25%胰酶+0.1%EDTA，大瓶加上3-4ml的消化液，慢慢摇晃一下，把细胞面全铺过后，放在培养箱，3min后细胞就几乎全掉下来了，然后收集，离心。不知道哪步做的不好，请指点。

欢乐桥

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3 E% L) ~1 I9 _! Q& x. N我们这的消化液用的是0.25%胰酶+0.1%EDTA，大瓶加上3-4ml的消化液，慢慢摇晃一下，把细胞面全铺过后，放在培养箱，3min后细胞就几乎全掉下来了，然后收集，离心。不知道哪步做的不好，请指点。

欢乐桥

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" J# T4 E, T4 q3 {: ~5 x3 o我们这的消化液用的是0.25%胰酶+0.1%EDTA，大瓶加上3-4ml的消化液，慢慢摇晃一下，把细胞面全铺过后，放在培养箱，3min后细胞就几乎全掉下来了，然后收集，离心。不知道哪步做的不好，请指点。

mania7041

胰酶应该使用0.25%事先在培养箱内放置10分钟，然后才加入175培养瓶的，平铺，注意在倒置显微镜下观察消化情况，适时终止

sdzysp

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" D- o8 S( l+ P7 d
3min时间长点了吧？一般2min就差不多了，你镜下注意观察，细胞变圆后轻轻拍打几下，看细胞大部分能振起来的就终止，别等细胞自己都掉下来了才终止，那样消化得有点过了。