请问怎么在镜下区分ES细胞和feeder？

prince

我的ES细胞消化后，在镜下观察怎么区分ES细胞和feeder？我主要是想对活ES细胞进行计数，用的白细胞计数板，或者有没有其他的方法，求大牛指点！

zpzp0312

把接种的feeder数目减去就行了

frankieisme

回复 prince 的帖子
  @; y! t  E# ~  T# g( W  S/ f* ^; z4 u8 a2 i( [9 q
通过差速贴壁法实现.具体方法:胰酶把细胞消化成单个细胞,之后用分化培养液重悬细胞,在事先0.1%明胶包被过的小皿中差速培养1h，大部分MEF  细胞已经牢固贴壁，而ES/iPS还没有贴壁，收集上清获得较纯的ES/iPS，计数之后悬滴培养。

redmaple

首先要明白feeder cells的作用，它只是提供必要的营养条件，在这里不会进行分裂和繁殖，没有必要除掉他们。像zpzp0312所说，减去就行。

frankieisme

回复 redmaple 的帖子
1 l. m7 P8 P2 A0 S+ G9 U0 y
' t- c& s; y1 A+ ]如何在镜下区分干细胞和MEF?  Z$ ]8 X3 z4 q) m
消化成单个细胞后,这两种细胞都是圆形的,代数比较长的MEF形态可能会比较大,但代数比较轻的MEF的大小跟ES/iPS是很难区分的.最好还是差速贴壁纯化后再计数.

lindan781229

差速贴壁纯化后再计数较可行，如果计数时加上形态辨别更好，ES细胞形态较圆，MEF较大较不规则

katysong

一般情况下，Feeder是不影响ES细胞分化的；$ L5 X- f3 @& R4 R
但如果想去除Feeder可以利用差速贴壁法，用胰酶将细胞消化成单细胞后，用培养基（可以是干细胞培养液，也可以是分化培养基，甚至Feeder培养基都可以）重悬，铺在普通的细胞培养皿中（不用Gelatin包被也可以），培养箱内静置15-20分钟，拿出培养皿前后左右摇晃收集上清即为ES细胞；' y, r; T# Z5 e+ f& K8 V4 k
若进一步想要活的ES细胞，可以将用于计数的细胞用台盼蓝染色，不着蓝色的即为活细胞；
* d. J/ N" Q% z0 t: H* _希望有所帮助，祝实验顺利。

prince

回复 zpzp0312 的帖子0 m! G* _0 u; a5 C* I1 P
- `# W- V1 g! C; T% f
feeder在ESC生长过程中会死亡，没办法减

prince

回复 frankieisme 的帖子
$ q1 ~+ V/ T9 g
( @4 x* [: ?4 l- j8 P差速也试过，但是不同的皿中贴壁的ES细胞有多少？这个计数误差也许很大

zpzp0312

回复 prince 的帖子( [1 C' \4 R1 d8 k! T, a
* x" a5 B6 ?5 ~! Q4 S
你就用无饲养层培养: H7 X( T( ?1 j5 j  r7 p
其实没有必要，计数时，镜下能区分出ESCs和MEFs