CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

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+ Q5 V9 v0 u+ B$ A+ Z% d( O' p如果实验室有HH-1的水浴锅，那1L的培养基瓶子正好可以放进去，培养箱不太好，因为培养基瓶子也不一定干净，你不能保证你的冰箱就完全无菌吧，如果带进培养箱反而不好，弄不好污染了培养箱里的细胞，而且水浴锅水导热也比空气快，所以还是水浴锅吧。+ s* h- V8 O) f$ c3 h1 w% K# N% T, q
培养基变紫这个问题，在培养箱或水浴锅都是一样的，因为你都是瓶盖拧上的，所以，没啥区别，再说培养基也是个缓冲体系，酸碱度变化不会很大的。
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还有，我觉得，有可能是IL-2，最近翻了一下Rosenberg主编的《癌症生物治疗——原理与实践》，里面有几句话对IL-2的描述是这样的——鼠剔除IL-2后，可使T细胞过度且无法控制地增值，因而提示IL-2不是T细胞在体内生长的必须因子，而是T细胞凋亡所必需。

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子4 g, Q4 M: D! s* |! B$ _- H6 u1 H
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预热这个问题，我发现水浴应该是比放在培养箱中要好一些，至少培养基pH值没发现有什么明显变化。你说的培养基瓶也可能将细菌带入培养箱中不是没有可能，应该注意！
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对于CIK的扩增来讲，anti-CD3单抗和IL-2是必需的，IFN-r和IL-1可增强CIK的细胞裂解毒性。所以我认为出问题的可能是前二者，不知道你们用的终浓度是多少呢，我们的分别是100ng/ml和2000U/ml，你觉得浓度高吗？

sunny.yc

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' @2 [4 r% q1 L/ I& d) \  r你试一下100ng/ml和1000U/ml吧，2000U/ml的IL-2实在是有点高了，大多都是300U到1000U，2000U我也是第一次听说
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不过，如果你现在才更改浓度，对于这份细胞来说，我觉得意义已经不大了，不过在对以后的实验肯定是有帮助的，2000U/ml，有点太高了

sunny.yc

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7 D4 i( k! b  J( A9 n还有就是，CD3单抗也只是前期才用到，所以，对于之后的扩增影响不是太大，而且单抗一般都是作为前期一次刺激就可以了
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你不会一直在添加单抗吧，呵呵

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子/ N3 G0 o+ Y) U. ?0 i

1 M8 l1 J$ l! b3 v2 a+ c7 j我们用的IL-2是国产的临床注射级别的，国产的一般效价一般都比较低一些吧，你们用的是国产还是进口的IL-2呢？国产的用2000也算高的了吗？
& r* N  L. @7 n6 T8 @anti-CD3单抗只是前期加，后期也是不加的。- J0 s- l9 g9 D2 s
目前来看，可能就是这两种因子的浓度过高吧

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子* ~: A5 n; J2 {0 y$ R" k
/ G; v) ~- X$ W
IL-2基本上都是用临床级的，试剂级的太贵了
, E. p- G0 M2 Y8 [1 o' [% cIL-2你先试一下1000吧，基本上都是这个使用量的
; d/ u' e3 }8 {5 H6 S- D# u: v+ S7 r; G& V+ d2 m( Y( q
CD3单抗也不算高，如果你只是前期加，100ng/ml 应该问题不大，我做的培养体系也是这个浓度，基本上没有什么问题

刘艳85

请问你用的是什么培养基？这个不是细菌污染，是不是细胞密度过高得不到营养而死亡导致的问题呢？

lyj-0017

回复 sunny.yc 的帖子; ]  t) b! @3 @0 U
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另外一个就是IFN-r，这个应该如何加呢？是在加抗CD3抗体前24小时加，还是制备当天与抗CD3抗体一同加入呢？加入的浓度应该多少呢？2000U/ml算高还是低呢？

lyj-0017

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5 }' H4 h3 l. X4 G0 b
: p  Y) B9 N2 b* J9 T用的是AIM-V ，如果是细胞密度过高的话，你认为培养袋中的细胞密度应该为多少比较合适呢？现在就是一直在找集落聚团的原因，你们以前遇到过这种情况吗？是如何解决的呢？

sunny.yc

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. l) Z+ a' E6 X4 P  t( H& Z# l你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素